[發(fā)明專利]紅霉素半抗原、人工抗原和抗體及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410241284.3
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN105273021B
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馮才偉;馮月君;馮才茂;李勇;崔廷婷;吳小勝;楊昌松;馮靜
• 申請（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/00;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K1/107;C07K16/44;G01N33/577
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本發(fā)明提供了一種紅霉素半抗原和人工抗原，分子結(jié)構(gòu)式分別為：本發(fā)明還公開了此半抗原、人工抗原和以此抗原制備的抗體的制備方法，以及半抗原、抗體的用途。本發(fā)明最終制成的抗體檢測靈敏度高、特異性強。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及選擇一種具有—COOH的、又最大可能包含紅霉素原有結(jié)構(gòu)的化合物作為紅霉素半抗原，以此半抗原制成的人工抗原、特異性抗體；以及此類半抗原、人工抗原、特異性抗體的用途，和半抗原、人工抗原、抗體的制備方法。

背景技術(shù)

紅霉素(Erythromycin A)屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，對葡萄球菌、各種鏈球菌和革蘭氏陽性桿菌均具有抗菌活性，主要用于抗畜禽細菌及支原體感染，亦可用作豬的飼料添加劑以促進增重和提高飼料轉(zhuǎn)換率，在畜禽、水產(chǎn)品養(yǎng)殖及其疾病治療過程中應(yīng)用廣泛。但是紅霉素能對機體產(chǎn)生一些副作用，如胃腸道反應(yīng)、膽汁郁積性黃疸以及靜滴時引起靜脈炎，還能引起壞死性肝病、精神障礙和關(guān)節(jié)炎綜合癥等，因此，紅霉素在生產(chǎn)上的大量使用會由于其在動物體內(nèi)代謝時間較長而在畜禽組織、蜂蜜、牛奶、魚蝦等產(chǎn)品中的殘留，危害公眾健康。目前世界各國為保證食品安全，對紅霉素的使用和紅霉素在食品中的殘留限量進行了規(guī)定，我國農(nóng)業(yè)部235號公告中規(guī)定紅霉素的最大殘留限量為動物組織200μg/kg，奶40μg/kg，蛋150μg/kg。

目前對紅霉素的研究主要集中在醫(yī)藥領(lǐng)域，食品中紅霉素殘留的相應(yīng)檢測方法研究報道較少，且多為儀器檢測，如薄層色譜法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法等。儀器檢測法存在樣品前處理繁瑣、檢測時間長、儀器貴重等缺點，所以在我國無法得到廣泛應(yīng)用，并且不符合現(xiàn)場檢測“在短時間內(nèi)低成本對大量樣品進行準確檢測和篩選”的要求。酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)，是將免疫技術(shù)與現(xiàn)代測試手段相結(jié)合而建立的一種超微量的測定方法，具有成本低、速度快、靈敏度高、儀器設(shè)備簡單的特點，適合大批量樣品的快速分析。而免疫學(xué)檢測方法的基礎(chǔ)是相應(yīng)的高特異性、高親和力的抗體的制備，而紅霉素作為小分子化合物，本身不具備免疫原性，因此，其半抗原的結(jié)構(gòu)改造和全抗原合成是建立免疫速測技術(shù)的關(guān)鍵和難點之一。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明提供一種能最大程度保留紅霉素的化學(xué)結(jié)構(gòu)，又具有一定長度連接臂的半抗原以及這種半抗原的制備方法；以此半抗原制備的人工抗原、檢測靈敏度高和特異性強的抗體；以及此半抗原、抗體的用途。

本發(fā)明為達到以上目的，是通過這樣的技術(shù)方案來實現(xiàn)的：提供一種紅霉素半抗原，它的分子結(jié)構(gòu)式為：

本發(fā)明的半抗原以紅霉素為起始原料，先與溴乙酸叔丁酯反應(yīng)生成中間體，再與甲酸反應(yīng)生成羧甲基紅霉素，即為紅霉素半抗原。反應(yīng)式如下：

本發(fā)明的紅霉素半抗原的制備方法進一步描述如下：

1)向100mL兩口燒瓶中加入0.5g溴乙酸叔丁酯、0.90g紅霉素和10mL丙酮，加熱至輕微回流，反應(yīng)20h后，抽濾白色固體；

2)向步驟1)所得固體粉末中加入10mL四氫呋喃和10mL甲酸，室溫反應(yīng)20h，蒸除溶劑得到羧甲基紅霉素，即為紅霉素半抗原。

上述方法制得的紅霉素半抗原，具有紅霉素特征結(jié)構(gòu)的同時又具有可以與蛋白質(zhì)偶聯(lián)的—COOH結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明還提供了一種依靠上述紅霉素半抗原制得的紅霉素人工抗原，它的分子結(jié)構(gòu)式為：

本發(fā)明的紅霉素人工抗原的制備方法描述如下：

1)18mg紅霉素半抗原溶于1mL N,N-二甲基甲酰胺中；