[發明專利]一種雙基因缺失粗糙型牛種布魯氏菌及其疫苗的生產方法

在審

• 申請號: 201410240832.0
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN104031874A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 王芳;丁家波;馮宇;王楠;朱良全;蔣卉;寧宜寶;王忠田;張廣川;毛開榮;康孟佼;范學政;印春生;李寧;戴志紅
• 申請（專利權）人: 中國獸醫藥品監察所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K39/10;A61P31/04;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

1.基因缺失粗糙型布魯氏菌，其特征在于采用非抗性篩選技術，缺失牛種布魯氏菌2308菌株wboA基因1～897bp之間的序列，使原始菌株由光滑型轉變為了粗糙型；同時缺失了vjbR基因，使重組菌的安全性進一步提高。用該菌(2308-ΔWboA-ΔvjbR)制備的疫苗免疫動物后，其血清可用常規的凝集試驗與自然感染相區分，牛種布魯氏菌(Brucella?abortus)2308-ΔWboA-ΔvjbR菌株已于2014年05月20日送交北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物保藏委員會普通微生物保藏中心，保藏號為：CGMCC?No.8884。

2.一種基因缺失粗糙型布魯氏菌活疫苗，其特征在于該疫苗該疫苗含有活的布魯氏菌CGMCC?No.8884株和獸用生物制品常用的凍干保護劑。

3.一種基因缺失粗糙型布魯氏菌活疫苗的生產方法，其特征在于用胰大豆肉湯作為重組菌疫苗制造用培養基，培養基滅菌后按培養基量的按1％～2％接入布魯氏菌CGMCC?No.8884株種子菌液，37℃，按常規方法發酵培養28～38h，加入凍干保護劑，充分混勻、分裝疫苗瓶中后經冷凍真空干燥，即成為2308-ΔWboA-ΔvjbR株基因缺失粗糙型布魯氏菌活疫苗。

4.一種基因缺失粗糙型布魯氏菌活疫苗的鑒別診斷，其特征在于使用如序列7、8和序列13、14所述序列的2對引物，通過PCR方法可對其進行特異性鑒別。