[發明專利]一種厭氧真菌乙酰酯酶活性的快速檢測方法

無效

• 申請號: 201410238895.2
• 申請日: 2014-05-25
• 公開（公告）號: CN104017857A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 曹陽春;姚軍虎;王臘梅;李宗軍;孫菲菲;魏筱詩;曹志昂;王衛濤;徐秀容
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/44
• 分類號: C12Q1/44
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種厭氧真菌乙酰酯酶活性的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

將待測液在1000×g離心10min，取上清液測定乙酰酯酶活性，將適當稀釋的上清液、2mM?p-硝基苯乙酯和50mM甘氨酸-氫氧化鈉緩沖溶液置于50℃預熱15-30min，然后向50μL適當稀釋的上清液中加入100μL甘氨酸-氫氧化鈉緩沖溶液和50μL?p-硝基苯乙酯溶液于干燥潔凈的96孔酶標板上，50℃反應15-30min后，用全自動酶標儀在410-420nm下檢測吸光值，根據p-硝基苯的標準曲線計算乙酰酯酶活性。

2.根據權利要求1所述的厭氧真菌乙酰酯酶活性的檢測方法，其特征在于，所述預熱時間為15min。

3.根據權利要求1所述的厭氧真菌乙酰酯酶活性的檢測方法，其特征在于，所述反應時間為30min。

4.根據權利要求1所述的厭氧真菌乙酰酯酶活性的檢測方法，其特征在于，所述全自動酶標儀檢測波長為415nm。

5.根據權利要求1所述的厭氧真菌乙酰酯酶活性的檢測方法，其特征在于，所述緩沖液為pH9.0的甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液。

6.根據權利要求5所述的厭氧真菌乙酰酯酶活性的檢測方法，其特征在于，所述沖液配制方法為：稱取0.7505g甘氨酸，用去離子水充分溶解，并定容至50mL，稱取0.4g氫氧化鈉，用去離子水充分溶解，并定容至50mL，用去離子水稀釋至50mM，甘氨酸和氫氧化鈉按照17∶3的比例配制使用。

7.根據權利要求1所述的厭氧真菌乙酰酯酶活性的檢測方法，其特征在于，所述2mM?p-硝基苯乙酯溶液的配制方法為：準確稱取0.3623g?p-硝基苯乙酯標準品溶于800mL去離子水中，然后定容至1L。

8.根據權利要求1所述的厭氧真菌乙酰酯酶活性的檢測方法，其特征在于，乙酰酯酶的1個酶活力單位(U)被定義為在上述酶促反應條件下，1mL檢測液在1min內自標準底物p-硝基苯乙酯中釋放1μM?p-硝基苯所需的酶量。