[發明專利]一種禽類羽毛的透射電鏡樣品處理方法

在審

• 申請號: 201410237904.6
• 申請日: 2014-06-02
• 公開（公告）號: CN104020025A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 陳燕;張亞峰;趙慧玲;李莉
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/34;G01N1/36;G01N1/30
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.?一種禽類羽毛的透射電鏡樣品處理方法，包括漂洗、脫水、浸透和聚合，其特征在于具體步驟為：

（1）漂洗液的配制：0.08-0.12%?Tween-20，0.2-0.28M?NaOH，甲酸/乙醇按體積比為2:（2.8-3.2）的混合液；

（2）包埋劑的配制：

SPI-Pon812包埋劑的配制：將SPI-Pon812、DDSA、NMA、DMP-30，逐樣加入燒杯中，攪拌混合后，置于磁力攪拌器攪動均勻；攪動20~60min后，用真空烘箱將包埋劑中的氣泡抽出，將配制好的包埋劑轉入干燥離心管中，4℃保存備用；

（3）漂洗：將羽小枝放入盛有Tween-20和NaOH混合液的青霉素瓶中，超聲振蕩；吸盡混合液，加入甲酸/乙醇混合液，手動振蕩后靜置2~3h；

（4）脫水：用無水乙醇和丙酮對羽小枝樣品進行脫水；

（5）浸透：用丙酮與包埋劑的混合液對羽小枝樣品進行梯度浸透，最后換成包埋板，用純包埋劑浸透樣品；?

（6）聚合：加熱聚合，完成羽小枝樣品的包埋。

2.?根據權利要求1所述的禽類羽毛的透射電鏡樣品處理方法，其特征在于，步驟（2）的SPI-Pon812包埋劑中，SPI-Pon812、DDSA、NMA、DMP-30按重量份數分別為：8-12份、3-5份、6-8份和0.3—0.4份。

3.?根據權利要求1所述的禽類羽毛的透射電鏡樣品處理方法，其特征在于，步驟（3）中對羽毛樣品先剝離出單根羽小枝并剪成2~3mm長度。

4.?根據權利要求1所述的禽類羽毛的透射電鏡樣品處理方法，其特征在于，步驟（3）中，羽小枝浸泡于混合清洗液中，借助水浴超聲振蕩，使羽小枝能較快浸潤直至不再漂浮于漂洗液上。

5.?根據權利要求1所述的禽類羽毛的透射電鏡樣品處理方法，其特征在于，步驟（4）中，用無水乙醇對樣品脫水2~3次，每次5~10min；丙酮脫水2~3次，每次10~20min。

6.?根據權利要求1所述的禽類羽毛的透射電鏡樣品處理方法，其特征在于，步驟（5）中，用15%~80%的丙酮和包埋劑的混合液對樣品進行三級梯度浸透；處理條件均為，25~35℃真空環境下，浸透24~48h；樣品轉入包埋板中后，純包埋劑浸透樣品；25~35℃真空環境下，浸透48~60h。

7.?根據權利要求1所述的禽類羽毛的透射電鏡樣品處理方法，其特征在于，步驟（6）中，真空環境下聚合，聚合溫度為60~70℃，聚合時間為48~72h。