[發(fā)明專(zhuān)利]一種以大型溞毒性為先導(dǎo)的農(nóng)藥廢水中關(guān)鍵致毒物質(zhì)鑒別方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410236171.4
• 申請(qǐng)日: 2014-05-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103983727A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史薇;鄧東陽(yáng);于紅霞;王玉婷
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 蔣海軍

1.一種以大型溞毒性為先導(dǎo)的農(nóng)藥廢水中關(guān)鍵致毒物質(zhì)鑒別方法，其步驟為：

(1)固相萃?。核畼油ㄟ^(guò)0.45um的尼龍膜過(guò)濾，過(guò)濾后水樣通過(guò)固相萃取柱進(jìn)行富集；

(2)富集：利用不同極性溶劑將有機(jī)物從固相萃取柱上洗脫下來(lái)，濃縮定容；

(3)大型溞毒性實(shí)驗(yàn)：將樣品替換成二甲基亞砜DMSO后溶于水配成不同濃度進(jìn)行大型溞暴露實(shí)驗(yàn)；

(4)分級(jí)分離：基于有機(jī)氮農(nóng)藥、多環(huán)芳烴、壬基酚、辛基酚建立制備色譜分離技術(shù)，并對(duì)樣品進(jìn)行分離來(lái)降低樣品的復(fù)雜性；

(5)分離組分的大型溞毒性實(shí)驗(yàn)：制備分離之后的組分利用液液萃取和固相萃取來(lái)濃縮，分離組分替換成二甲基亞砜DMSO溶于水配成不同濃度進(jìn)行型溞暴露實(shí)驗(yàn)；

(6)大型溞毒性結(jié)果計(jì)算：將大型溞的觀測(cè)值與濃度值的對(duì)數(shù)LogC用SPSS軟件中的回歸Probit做統(tǒng)計(jì)，在統(tǒng)計(jì)中找到50％抑制率對(duì)應(yīng)的LogC，計(jì)算出半數(shù)抑制濃度EC50；

(7)致毒組分中化合物的定性識(shí)別：利用高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)致毒組分進(jìn)行掃描，得到一級(jí)及二級(jí)譜圖；

(8)可疑致毒物的篩選：基于分級(jí)分離方法得到化合物的流出曲線，從而確定正辛醇-水分配系數(shù)LogKow對(duì)時(shí)間的分布，利用LogKow范圍來(lái)篩選化合物，通過(guò)挖掘和解析質(zhì)譜譜圖數(shù)據(jù)軟件PeakView打開(kāi)一級(jí)二級(jí)譜圖，將其譜圖通過(guò)網(wǎng)絡(luò)化學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)ChemSpider搜索得到化合物清單，并將文獻(xiàn)查閱帶的化合物定量離子對(duì)與二級(jí)譜圖匹配；

(9)可疑致毒物的定量確認(rèn)：篩選到的化合物通過(guò)生態(tài)結(jié)構(gòu)活性關(guān)系ECOSAR軟件得到其毒性值EC50，并利用液質(zhì)對(duì)其進(jìn)行定量，得到化合物的毒性單位TU，計(jì)算化合物在樣品總毒性中的貢獻(xiàn)率最終找到主要致毒物。

2.根據(jù)權(quán)利1要求所述的以大型溞毒性為先導(dǎo)的農(nóng)藥廢水中關(guān)鍵致毒物質(zhì)鑒別方法，其特征在于：所述的步驟(1)中所用的固相萃取柱為Waters?Oasis?HLB固相萃取小柱，使用之前用正己烷、二氯甲烷、甲醇以及去離子水活化，整個(gè)過(guò)程保證小柱濕潤(rùn)。

3.根據(jù)權(quán)利1要求所述的以大型溞毒性為先導(dǎo)的農(nóng)藥廢水中關(guān)鍵致毒物質(zhì)鑒別方法，其特征在于：所述的步驟(2)中所用的不同極性溶劑為5mL正己烷、10mL二氯甲烷和10mL甲醇。

4.根據(jù)權(quán)利1要求所述的以大型溞毒性為先導(dǎo)的農(nóng)藥廢水中關(guān)鍵致毒物質(zhì)鑒別方法，其特征在于：所述的步驟(4)中分級(jí)分離的參數(shù)如下：

制備色譜儀：Waters?AutoPurification?HPLC；色譜柱：Waters?XBridge?C18制備柱，所述制備柱尺寸為19mm×150mm，粒徑為5um；流速：5mL/min；流動(dòng)相：甲醇，含體積百分比為1‰三氟乙酸與水的混溶液。

5.根據(jù)權(quán)利1要求所述的以大型溞毒性為先導(dǎo)的農(nóng)藥廢水中關(guān)鍵致毒物質(zhì)鑒別方法，其特征在于：所述的步驟(7)中的儀器參數(shù)如下：高效液相色譜儀HPLC：Agilent1260；色譜柱：Agilent?C18柱，所述色譜柱尺寸為2.1mm×150mm，粒徑為2.5um；柱溫：30℃；流速：0.3mL/min；流動(dòng)相：乙腈，含體積百分比為5％乙腈與水的混溶液；質(zhì)譜儀：Triple?TOF5600—AB?SCIEX；離子源：ESI；電離模式：正離子模式；MS掃描范圍：100—2000m/z；MS-MS掃描范圍：100—1250m/z；驅(qū)簇電壓：80V；碰撞電壓：35±15eV。

6.根據(jù)權(quán)利1-5中任一項(xiàng)所述的以大型溞毒性為先導(dǎo)的農(nóng)藥廢水中關(guān)鍵致毒物質(zhì)鑒別方法，其特征在于：所述的步驟(8)中利用挖掘和解析質(zhì)譜譜圖數(shù)據(jù)軟件PeakView中的提取離子使用窗口提取精確的質(zhì)荷比得到一級(jí)質(zhì)譜圖，再利用信息依賴(lài)性獲取模式找到該質(zhì)荷比的二級(jí)質(zhì)譜圖，利用一級(jí)及二級(jí)質(zhì)譜圖通過(guò)網(wǎng)絡(luò)化學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)ChemSpider搜索得到化合物清單，再將文獻(xiàn)報(bào)道化合物的定量離子對(duì)與二級(jí)質(zhì)譜圖匹配。