[發明專利]一種測定多糖糖組分的分析方法

無效

• 申請號: 201410236122.0
• 申請日: 2014-05-29
• 公開（公告）號: CN104007201A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 王兆梅;廖偉;李滿鳳
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N27/48
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蔡茂略

技術領域

本發明屬于多糖中糖組分的定性和定量分析技術領域，具體涉及一種測定多糖糖組分的改進分析方法。

背景技術

多糖是自然界中含量最豐富的物質之一，對維持生命活動起著至關重要的作用。在生命過程中，多糖不僅作為能量物質和結構物質，而且還具有抗腫瘤、抗衰老、抗病毒、免疫調節及降血糖等多種生物活性，廣泛地應用于保健食品、醫藥和臨床上。

多糖結構分析對于多糖研究十分重要：揭示多糖構效關系、開發新型功能多糖。然而，鑒于高分子多糖的復雜性，沒有直接儀器手段解析多糖結構，目前，常用的方法，均需要將多糖降解為單糖來分析，因此，多糖的糖組成分析方法包括兩個步驟：多糖酸水解為含單糖的水解液及色譜法檢測分析單糖。酸水解是將多糖降解為單糖的主要方法，是多糖結構分析的必要步驟。然而，多糖是一個高結晶度的高分子聚集體，結晶多糖分子排列緊密，由于多糖分子聚集體內腔的疏水作用以及分子間的空間位阻，酸在糖聚集體中滲透慢，導致水解時間延長，因此，多糖水解是一個高溫強酸性條件下的長時間的化學過程；另一方面，在特定酸性條件下，不同的單糖殘基水解程度不同，位于支鏈的糖苷鍵較主鏈的糖苷鍵易于水解，呋喃糖較吡喃糖易于水解；與糖醛酸相連的則糖苷鍵難水解鑒于天然多糖大部分為非均一的雜多糖，以上易水解和難水解的結構共存，這造成兩方面的矛盾，一方面，易于水解的部分，單糖很快釋放出來；另一方面，難降解部分仍需要高溫強酸下長時間處理，這導致已經水解的單糖由于受到長時間高溫強酸的作用，發生降解，水解液顏色較深，從而產生損失，不利于定量分析。因此，目前多糖糖組份分析的前期酸水解液普遍存在未水解殘渣多、水解液顏色深，有新的糖衍生物等干擾物生成，不利于后續的色譜分析?？梢?，破壞高結晶多糖的網狀骨架，降低分子結晶度將是提高酸水解效率的關鍵。

離子液體是近年來興起的一種十分具有良好應用前景的綠色溶劑。Rogers研究組首先發現了氯化1-丁基-3-甲基咪唑([BMIM]Cl)可溶解自然界中最為廣泛的多糖纖維素，Dadi等研究表明，纖維素經[BMIM]Cl離子液體預處理后可提高糖化速度。鑒于以上研究結果，將離子液應用于多糖水解的預處理，將降低多糖的結晶度，促進酸在多糖分子間的滲透，從而縮短水解時間，避免已水解單糖破壞。

目前報道單糖測定的方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、親和色譜、酶學法和毛細管電泳法等，這些分析方法普遍靈敏度不高、分離效果差，目前通用的方法是氣相色譜法，它解決了以上儀器部分分離單糖各種同分異構體的問題，但是該方法需要進行復雜的衍生化處理，同時，衍生化過程中還造成單糖的損失，給定量分析帶來困難。離子色譜-脈沖安培檢測糖是近年發展起來的新方法，該方法無需衍生，就能分析幾乎所有的單糖和大部分寡糖及低聚糖，操作簡便，無需復雜樣品前處理，更無需衍生，而且具有極高的靈敏度，通?？梢詸z測到pmoL級的糖類物質，但結合酸水解分析高結晶度的多糖中糖組分和含量，尚未見報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的在于提供一種聯合離子液預處理、酸溶劑處理及離子色譜-脈沖安培檢測法定性和定量分析高結晶多糖的單糖組分的方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種測定多糖糖組分的分析方法，包括以下步驟：

(1)離子液預處理及多糖再生：將待測多糖與離子液在油浴鍋中充分溶解得到多糖溶解液，待所述多糖溶解液冷卻后倒入再生溶劑中得到沉淀，反復沖洗，離心得到再生多糖粗產品，通風使再生多糖粗產品內殘余的再生溶劑完全揮發，干燥后得到再生多糖；

所述待測多糖為目前常規的多糖類型，尤其可為高結晶的多糖，優選的為酵母β-葡聚糖、蟲草多糖、凝結多糖或龍膽多糖中的一種；

優選的，所述離子液為1-丁基-3-甲基咪唑氯鹽([Bmim]Cl)、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽([Emim]Ac)、1-烯丙基或3-甲基咪唑氯鹽([Amim]Cl)中的一種以上；

優選的，所述待測多糖與離子液的質量比為1:(15～25)；

優選的，所述充分溶解的條件為：溶解溫度為80～100℃，溶解時間為2～4h；

優選的，所述多糖溶解液冷卻后的溫度為50℃；

優選的，所述再生溶劑為無水乙醇或水；

優選的，所述再生溶劑的用量為離子液體積的5～10倍；

優選的，所述干燥的條件為：干燥溫度為50～80℃，真空度為0.05～0.1KPa，干燥時間為2～5h；