[發明專利]一種SSR擴增產物非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法及裝置

有效

• 申請號: 201410234799.0
• 申請日: 2014-05-30
• 公開（公告）號: CN103995039B
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 王霖;李興峰;鮑印廣;李君;丁安明
• 申請（專利權）人: 濟寧市農業科學研究院;山東農業大學
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種SSR擴增產物非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法及裝置，本裝置用三塊玻璃板采用3夾2的夾心式組合方式，將分離膠同時倒入三塊玻璃板之間形成的兩個夾層之間，一次灌膠可以制成兩塊分離膠版。由于兩塊帶有方形缺口的玻璃板凹下的尺寸不同，形成凝膠后兩個膠版的點樣孔的高度不同，點樣時不容易發生錯誤，避免應該點在一個膠版上的樣品錯誤的點到另外一個膠版上。本發明一次灌膠可以同時制作兩塊膠版，配膠、灌膠過程和常規的一次只能灌一塊膠相比工作效率提高30％以上。在后續的固定、染色、定影、顯影過程中，一次處理的膠版數量較常規方法增加，總體可以節省電極緩沖液、顯影液、染色液、固定液等用量30％左右。

技術領域

本發明屬于生物化學技術領域，涉及一種SSR擴增產物非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法及裝置。

背景技術

凝膠電泳技術由于具有快速、簡便及高分辨率等優點，其應用十分廣泛。從分離與分析無機離子到復雜的生物高分子化合物，以及在放射化學和免疫化學中都占有重要的地位；在生化實驗室和生化工業方面應用更為普通；醫藥部門還用作臨床診斷。在各類電泳技術中，尤以凝膠電泳在分離分析酶、蛋白質、核酸等生物大分子等方面分辨力為最高，為生物化學，分子生物學的發展作出了重大貢獻。現有方法一次灌膠只能制作1塊垂直板凝膠電泳膠版，1個普通垂直板凝膠電泳槽最多可以同時電泳2快膠版。

發明內容

本發明的目的在于克服上述技術存在的缺陷，提供一種SSR擴增產物非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法及裝置，采用本裝置可以同時制作2塊膠，1個普通垂直板凝膠電泳槽最多可以同時電泳4快膠版，電泳槽利用效率提高1倍，提高工作效率30％以上。其具體技術方案為：

一種SSR擴增產物非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳方法，包括以下步驟：

1 聚丙烯酰胺凝膠制備：

1.1 清洗玻璃板、灌膠用量筒和燒杯，玻璃板氣干(制膠用玻璃板灌膠面必須干凈無水分，否則灌膠時容易產生氣泡；燒杯、量筒和玻璃板如果有水，由于膠與水不相溶，易使膠不能牢固粘在玻璃板上)；

1.2 將平口玻璃板和凹口玻璃板放在桌面的支撐物(柱狀玻璃體墊塊等)上，給玻璃板滴少量100％乙醇，用質量好的紙均勻擦洗制膠面，氣干，淺凹玻璃板先用酒精擦洗一面，氣干后翻轉，再擦拭另一面氣干；

1.3 平口玻璃板和凹口玻璃板的二個短邊均勻的涂抹適量凡士林；

制作膠版時先把玻璃板放在墊塊上，然后在靠近其兩個短邊的邊緣分別放上一個膠條，膠條短邊和沒有凹口的玻璃板底邊放齊，長邊玻璃板的短邊平行，用手將膠條按牢固，在兩個膠條上面放上淺凹玻璃板，然后同樣地在靠近玻璃板短邊邊緣分別放上一個膠條，用手按牢，然后再把深凹玻璃板放在膠條上；要求兩塊凹口玻璃板的缺口在同一方向上，三塊玻璃板的另外三個邊疊放整齊；這樣在三塊玻璃板之間就形成了兩個夾層，最后用夾子固定；

1.4 配膠、灌膠：

將以下母液按量混合均勻保存于4℃，一般一周內用完，

針對所選用的膠的大小和厚度量取適量以上混合液倒入干凈燒杯，加入適量10％APS和TEMED，搖勻，在平放狀態下，將配好的分離膠從凹口邊倒入兩個夾層中，緩慢插入與膠厚度一致的梳子，同時避免梳齒下產生氣泡，待膠凝固；

2 電泳

2.1 在電泳槽防止緩沖液下滲的橡膠條上均勻涂抹適量凡士林，用來防止上槽緩沖液滲入下槽，往上下電泳槽先加入適量1x TBE電泳緩沖液；

2.2 膠凝固后，拔去梳子，并用水稍微沖洗點樣孔處，斜著將玻璃板放入電泳槽，避免膠底端與緩沖液相接處產生氣泡，用夾子將玻璃板固定于電泳槽上，再加入緩沖液，使上槽緩沖液至少蓋住點樣孔，下槽緩沖液至少與膠下邊緣相平齊，然后用電泳緩沖液沖洗點樣孔；