[發明專利]一種單細胞轉移方法和轉移系統

在審

• 申請號: 201410234610.8
• 申請日: 2014-05-29
• 公開（公告）號: CN105316281A
• 公開（公告）日: 2016-02-10
• 發明（設計）人: 曾橋;薛志剛
• 申請（專利權）人: 蘇州萊茵爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N5/075;C12N5/04;C12N5/0775;C12M1/00
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技術領域

本發明生物檢測領域，尤其涉及一種單細胞轉移方法和轉移系統。

背景技術

單細胞水平分析是細胞生物學、神經生物學和胚胎植入前遺傳學診斷中不可缺少的一項，需要通過對單細胞進行操作，來實現單細胞水平的基因檢測、神經電生理檢測、免疫學檢測、蛋白檢測等。其中單細胞轉移操作是實現各類檢測首要的一步。

目前單細胞轉移的方法主要有：①以顯微操作系統作為轉移裝置的單細胞轉移方法和②以口吸式吸管作為轉移裝置的單細胞轉移方法。此類方法存在諸多不足，如：顯微操作系統作為轉移裝置的過于依賴儀器，操作過程繁瑣，細胞轉移效率低下；口吸式吸管作為轉移裝置的不能精確控制轉移液體體積，常常攜帶的液體過多而影響檢測結果；此外，這些方法特別不適用于單細胞基因檢測，包括單細胞基因組檢測、單細胞轉錄組檢測、單細胞基因突變檢測、單細胞染色質(體)檢測等，所以難以推廣應用。

發明內容

本發明的目的是針對現有的單細胞轉移裝置操作過程復雜，細胞轉移效率低，不能精確控制轉移液體體積的不足，提供一種單細胞轉移方法和轉移系統，從而能夠準確地轉移單細胞，并且能夠方便、快捷地轉移單細胞，轉移的單細胞轉移效率、存活率高。

針對上述目的，本發明提供的技術方案如下：

一方面，本發明提供一種單細胞轉移方法，所述方法包括以下步驟：

1)高溫烘烤吸管，然后將所述吸管的一段封閉為封閉端，另一端作為吸入端，用于轉移單細胞的吸管，所述吸入端的直徑適合所述單細胞；

2)將所述吸管的吸入端置于粘稠的礦物油中，所述礦物油在毛細管力作用下進入吸管內，再將所述吸管取出，擠壓所述吸管的封閉端，擠出微量礦物油，得到載有礦物油的吸管；

3)然后于倒置顯微鏡或體視鏡下，將所述載有礦物油的吸管的吸入端的端口對準溶液的單細胞，將所述單細胞吸入吸管，得到載有單細胞的吸管，并通過所述倒置顯微鏡或體視鏡控制進入所述吸管中溶液的體積；

4)再將所述載有單細胞的吸管轉移至目的位置后，加壓引導吸管形變，將所述單細胞從吸管中排出，即得。

優選地，所述吸管中溶液的體積為3～15nl(納升)，在該體積下轉移細胞時攜帶能夠盡可能少液體成分，以避免攜帶液體成分對后續細胞操作帶來的負面影響。

優選地，在步驟1)中，所述吸管為玻璃管或巴氏德吸管。

更優選地，當所述吸管為玻璃管時，所述吸入端通過高溫烘烤后拉伸至適合所述單細胞的直徑。

優選地，在步驟1)中，用酒精燈或電阻儀高溫烘烤吸管。

優選地，所述單細胞為動植物細胞或動物卵子、極早期動物胚胎。

另一方面，本發明還提供一種單細胞轉移系統，所述系統包括用于轉移單細胞的吸管和倒置顯微鏡或體視鏡，所述吸管中載有礦物油，所述吸管包括封閉端和吸入端，所述吸入端的直徑適合所述單細胞；所述倒置顯微鏡或體視鏡用于控制進入所述吸管中液體的體積。

優選地，所述吸管中溶液的體積為3～15nl(納升)。

優選地，所述吸管通過酒精燈或電阻儀高溫烘烤。

優選地，所述單細胞為動植物細胞或動物卵子、極早期動物胚胎。

本發明的單細胞轉移方法和系統結合了礦物油的粘稠性能、半封閉玻璃管，能夠在擠壓下發生形變，來實現單細胞轉移的方便快捷準確、攜帶液體微量的目的，并通過在倒置顯微鏡或體視鏡更準確控制進入玻璃管中液體的體積，便于進一步單細胞水平的基因檢測、細胞功能檢測等操作，轉移的單細胞轉移效率、存活率高。對于動物卵子與早期胚胎轉移，每分鐘可轉移30-100個，對于動植物細胞或卵裂球每分鐘可轉移20-60個，轉移的細胞、卵子、胚胎、卵裂球的存活率接近100％，能夠得到廣泛地推廣應用。

附圖說明

圖1為本發明所述的用于轉移單細胞的吸管的結構示意圖，其中，A為吸入端為直通型的吸管的結構示意圖；B為吸入端為彎折型的吸管的結構示意圖；C為吸入端為直通型，中間為球形的吸管的結構示意圖；D為吸入端為彎折型，中間為球形的吸管的結構示意圖；

圖中，1為吸入端，2為封閉端。

具體實施方式

以下結合附圖對本發明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發明，并非用于限定本發明的范圍。

除非特別指明，以下實施例中所用的試劑均可從正規渠道商購獲得。

除非特別指明，以下實施例中所用的小鼠為ICR品系小鼠，購自同濟大學動物中心；小鼠骨髓間充質干細胞購自同濟大學干細胞中心；小麥細胞由試驗田種植，品系為“中13”。