[發明專利]一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液及其制備方法

無效

• 申請號: 201410234527.0
• 申請日: 2014-05-29
• 公開（公告）號: CN103983793A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 邱實;劉菁
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種蛋白質芯片點樣緩沖液，具體來說是一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液及其制備方法。

背景技術：

生物芯片技術是上世紀90年代初發展起來的一種高通量、大規模并行分析檢測技術,曾被Science雜志兩度評為年度十大科技突破之一，它是利用分子間特異相互作用的原理，將多種技術(如生物化學、微加工、微電子、計算機等)融為一體的一項分析檢測技術。與傳統分析檢測方法所不同的是，它形成的微陣列使生化分析反應過程高度集成于某一載體之上，高通量地分析檢測成百上千種DNA、RNA、多肽、蛋白質等分子。目前常見的生物芯片有：基因芯片、蛋白質芯片、糖芯片以及其他小分子生物芯片。

在基因組學的研究背景下，為了滿足人類對數以萬計基因功能的大規模研究，基因芯片應運而生。基因芯片是依據堿基互補配對原則，將大量已知序列的核酸探針高密度有序固定于某一載體表面，從而對待檢樣品中大量核酸成分進行分析檢測的技術，其高通量、快速、簡便等優點滿足了人們對基因的大規模分析檢測的需求。目前，基因芯片主要應用于基因表達檢測、雜交測序、疾病預測和診斷等領域。但是，基因水平上的研究只能初步了解基因表達產物的變化，而作為直接影響生命活動變化的蛋白質則需要經過轉錄、翻譯、加工等多個調控步驟才能形成，所以對其功能和結構的研究將具有重大的科學意義。隨著蛋白組學研究的興起，如同起初對基因組學的研究一樣，在利用傳統方法對蛋白質組功能進行分析研究時，同樣遇到了現有技術耗時、繁瑣、通量低等一系列問題。在彌補這些研究方法缺陷時，人們自然而然地模仿了基因芯片的原理，從而研制出了蛋白質芯片。

蛋白質芯片是將各種蛋白質(如抗原、抗體)、多肽以及受體、配體等有序固定于某一載體(如濾膜、凝膠、玻片、納米微珠和微孔板)之上，以分析檢測樣品中能與之特異相互作用的成分。雖然蛋白質芯片是在蛋白質組學的研究背景下產生的，但其應用不僅僅只局限于蛋白質組學。凡是有關抗體—抗原、蛋白質—蛋白質、蛋白質—核酸、蛋白質—脂類、蛋白質—小分子以及酶與底物相互作用的研究中，蛋白質芯片技術均有其獨特的用途。目前主要應用于蛋白質組學、食品檢驗、疾病診斷、藥物篩選、農林畜牧業、司法鑒定等領域。

雖然，蛋白質芯片經過20多年的發展，但目前所遇到的問題及技術難點仍較多，其中一難點即是，批量化生產固相蛋白質芯片中樣點的質量控制問題。因當前在蛋白質芯片的實際應用中，所使用的點樣緩沖液多為無色的碳酸鹽或磷酸鹽緩沖液，使得芯片在點樣后樣點仍成無色狀態，導致芯片在使用前無法對其樣點的形態進行預判，樣點是否呈現圓潤的狀態，是否會在檢測顯色后呈現“咖啡環”現象，從而嚴重影響定量檢測信號值的讀取，甚至點樣抗體是否已經點在基片上，這些都無從知曉，而現今并沒有一種方法可以解決上述批量化生產蛋白質芯片的質量控制問題。

麗春紅(Ponceau?S)，是煤焦油提煉出來的原料合成的偶氮染料，作為一種生物染色劑使用，可用于硝酸纖維素膜、PVDF膜和醋酸纖維素膜上蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合，同時麗春紅也可以與蛋白質的非極性區域相結合，從而在膜上形成紅色的斑點或條帶。麗春紅對蛋白質的染色是可逆的，染色后可以用PBST，蒸餾水或其它適當溶液洗去。

發明內容：

針對上述現有技術中存在的缺陷，本發明所要解決的技術問題是提供一種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液，所述的這種含麗春紅的蛋白質芯片點樣緩沖液要解決現有技術中的點樣緩沖液多為無色的碳酸鹽或磷酸鹽緩沖液，使得芯片在點樣后樣點仍成無色狀態，導致芯片在使用前無法對其樣點的圓潤及均勻程度進行預判，從而無法對蛋白質芯片的批量化生產進行質量控制的技術問題。

本發明提供了一種用于蛋白質芯片的點樣緩沖液，由麗春紅、Na₂CO₃、NaHCO₃、甘油和去離子水組成，所述的甘油和去離子水的體積比為3:1～1:20，在所述的點樣緩沖液中，所述的Na₂CO₃的質量百分比濃度為0.05％～1％，所述的NaHCO₃的質量百分比濃度為0.05％～2％，所述的麗春紅的質量百分比濃度為0.01％～50％。

進一步的，所述的點樣緩沖液的pH為7～11。

進一步的，以1L來計算，在所述的點樣緩沖液中，Na₂CO₃為1.59g，NaHCO₃為2.93g，麗春紅為10g，甘油為100mL，余量為去離子水。