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[發明專利]維甲酸誘導干細胞分化的用途在審

專利信息
申請號: 201410233756.0 申請日: 2014-05-29
公開(公告)號: CN105132362A 公開(公告)日: 2015-12-09
發明(設計)人: 陸華;萬謙;劉志斌 申請(專利權)人: 成都中醫藥大學
主分類號: C12N5/0735 分類號: C12N5/0735
代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 代理人: 李高峽;杜朗宇
地址: 611137 四川*** 國省代碼: 四川;51
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 甲酸 誘導 干細胞 分化 用途
【說明書】:

技術領域

發明涉及維甲酸的新用途,具體涉及維甲酸作為干細胞誘導分化劑中的用途。

背景技術

胚胎干細胞能被誘導分化為多種不同種類的細胞,比如神經細胞、心肌細胞、生殖細胞、骨細胞、脂肪細胞等[1]。目前,干細胞的體外誘導系統被廣泛研究,多種誘導物被發現能誘導干細胞進行體外分化,包括PDGF、BMP2、BMP4、ActivinA、bFGF、Wnt3a、RA、FGF、DMSO和TGF-b1等[2–6].

維甲酸(RA)是維生素A的衍生物,其已被發現能誘導小鼠胚胎干細胞向生殖細胞分化[7]。特別之處在于,RA能顯著刺激Stra8的表達,這是RA干預干細胞后的標志事件[8]

前期研究中發現,齊墩果酸(OA)和維甲酸(RA)對小鼠胚胎干細胞1B10(MESC-1B10)具有相似的作用:能誘導MESC-1B10向雌性和雄性生殖細胞分化,但是同時發現兩者對于小鼠胚胎干細胞D3(MESC-D3)的影響不同:OA能誘導MESC-D3向雌性和雄性生殖細胞分化,而RA不能誘導MESC-D3向生殖細胞分化[11]。根據前期的試驗可以看出,不同的小鼠胚胎干細胞對于RA具有不同反應。

小鼠胚胎干細胞R1/E(MESC-R1/E)細胞株于1991年八月被建立,來源于小鼠129X1品系與129S1品系交配后形成的3.5天齡的囊胚,它的性別為雄性,同時這株細胞被表明能形成生殖細胞[21]。它與MESC-1B10、MESC-D3屬于小鼠干細胞的不同細胞株,它們之間具有不同的遺傳背景。

目前還未見維甲酸對小鼠胚胎干細胞R1/E誘導分化的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供維甲酸作為誘導小鼠胚胎干細胞R1/E干細胞分化劑中的用途。

本發明提供了維甲酸或其藥學上可接受的鹽、酯或水合物在制備將小鼠胚胎干細胞R1/E定向分化為雌性生殖細胞的誘導分化劑中的用途。

誘導分化劑,即誘導細胞分化的物質,這種物質可以是單一化合物,也可以是多種成分的組合,其存在或使用的形式可以是固體、半固體,也可以是液體。

進一步地,所述藥學上可接受的鹽為維甲酸與金屬離子或酸形成的鹽。

其中,金屬離子成鹽形式多采用維甲酸與金屬離子形成的鉀鹽、鈉鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽等,常用的成鹽手段是將維甲酸與相應堿反應制備而成;除與金屬離子成鹽外,維甲酸還可以與酸成鹽,包括藥學上常見的有機酸或無機酸,如鹽酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、苯磺酸鹽、氫溴酸鹽、氫氟酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽等。

進一步地,所述藥學上可接受的酯為維甲酸與C1-C4醇形成的酯。

其中,所述C1-C4醇為甲醇或乙醇。

進一步地,所述誘導分化劑是上調GDF-9、Stra8、SCP3、Mvh、ZP1、ZP2、ZP3基因表達、下調Itag6、Itgb1基因表達的誘導分化劑。

其中,將小鼠胚胎干細胞R1/E定向分化為雌性生殖細胞的具體操作步驟為:

a、取小鼠胚胎干細胞R1/E;

b、置于含有的維甲酸或其藥學上可接受的鹽、酯或水合物的培養液中培養,培養時間不低于72小時,即得雌性生殖細胞。

進一步地,步驟b所述培養液中維甲酸或其藥學上可接受的鹽、酯或水合物的含量以維甲酸計為3μg/ml。

“含量以維甲酸計”,表明維甲酸藥學上可接受的鹽、酯或水合物在培養液中的含量也通過維甲酸進行換算。

進一步地,步驟b中,所述培養時間為72小時。

本發明還提供了一種將小鼠胚胎干細胞R1/E定向分化為雌性生殖細胞的方法,它包括如下操作步驟:

a、取小鼠胚胎干細胞R1/E;

b、置于含有的維甲酸或其藥學上可接受的鹽、酯或水合物的培養液中培養,培養時間不低于72小時,即得雌性生殖細胞。

進一步地,步驟b所述培養液中維甲酸或其藥學上可接受的鹽、酯或水合物的含量以維甲酸計為3μg/ml。

進一步地,步驟b中,所述培養時間為72小時。

本發明研究表明,RA能誘導MESC-R1/E向雌性生殖細胞分化,但不能向雄性生殖細胞分化,可以將RA或其藥學上可接受的鹽、酯或水合物作為將小鼠胚胎干細胞R1/E定向分化為雌性生殖細胞的誘導分化劑使用。

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