[發(fā)明專利]維甲酸誘導(dǎo)干細(xì)胞分化的用途在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410233756.0 | 申請(qǐng)日: | 2014-05-29 |
| 公開(公告)號(hào): | CN105132362A | 公開(公告)日: | 2015-12-09 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 陸華;萬謙;劉志斌 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 成都中醫(yī)藥大學(xué) |
| 主分類號(hào): | C12N5/0735 | 分類號(hào): | C12N5/0735 |
| 代理公司: | 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222 | 代理人: | 李高峽;杜朗宇 |
| 地址: | 611137 四川*** | 國省代碼: | 四川;51 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 甲酸 誘導(dǎo) 干細(xì)胞 分化 用途 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及維甲酸的新用途,具體涉及維甲酸作為干細(xì)胞誘導(dǎo)分化劑中的用途。
背景技術(shù)
胚胎干細(xì)胞能被誘導(dǎo)分化為多種不同種類的細(xì)胞,比如神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞、生殖細(xì)胞、骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等[1]。目前,干細(xì)胞的體外誘導(dǎo)系統(tǒng)被廣泛研究,多種誘導(dǎo)物被發(fā)現(xiàn)能誘導(dǎo)干細(xì)胞進(jìn)行體外分化,包括PDGF、BMP2、BMP4、ActivinA、bFGF、Wnt3a、RA、FGF、DMSO和TGF-b1等[2–6].
維甲酸(RA)是維生素A的衍生物,其已被發(fā)現(xiàn)能誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化[7]。特別之處在于,RA能顯著刺激Stra8的表達(dá),這是RA干預(yù)干細(xì)胞后的標(biāo)志事件[8]。
前期研究中發(fā)現(xiàn),齊墩果酸(OA)和維甲酸(RA)對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞1B10(MESC-1B10)具有相似的作用:能誘導(dǎo)MESC-1B10向雌性和雄性生殖細(xì)胞分化,但是同時(shí)發(fā)現(xiàn)兩者對(duì)于小鼠胚胎干細(xì)胞D3(MESC-D3)的影響不同:OA能誘導(dǎo)MESC-D3向雌性和雄性生殖細(xì)胞分化,而RA不能誘導(dǎo)MESC-D3向生殖細(xì)胞分化[11]。根據(jù)前期的試驗(yàn)可以看出,不同的小鼠胚胎干細(xì)胞對(duì)于RA具有不同反應(yīng)。
小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E(MESC-R1/E)細(xì)胞株于1991年八月被建立,來源于小鼠129X1品系與129S1品系交配后形成的3.5天齡的囊胚,它的性別為雄性,同時(shí)這株細(xì)胞被表明能形成生殖細(xì)胞[21]。它與MESC-1B10、MESC-D3屬于小鼠干細(xì)胞的不同細(xì)胞株,它們之間具有不同的遺傳背景。
目前還未見維甲酸對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E誘導(dǎo)分化的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供維甲酸作為誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E干細(xì)胞分化劑中的用途。
本發(fā)明提供了維甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或水合物在制備將小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E定向分化為雌性生殖細(xì)胞的誘導(dǎo)分化劑中的用途。
誘導(dǎo)分化劑,即誘導(dǎo)細(xì)胞分化的物質(zhì),這種物質(zhì)可以是單一化合物,也可以是多種成分的組合,其存在或使用的形式可以是固體、半固體,也可以是液體。
進(jìn)一步地,所述藥學(xué)上可接受的鹽為維甲酸與金屬離子或酸形成的鹽。
其中,金屬離子成鹽形式多采用維甲酸與金屬離子形成的鉀鹽、鈉鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽等,常用的成鹽手段是將維甲酸與相應(yīng)堿反應(yīng)制備而成;除與金屬離子成鹽外,維甲酸還可以與酸成鹽,包括藥學(xué)上常見的有機(jī)酸或無機(jī)酸,如鹽酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、苯磺酸鹽、氫溴酸鹽、氫氟酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽等。
進(jìn)一步地,所述藥學(xué)上可接受的酯為維甲酸與C1-C4醇形成的酯。
其中,所述C1-C4醇為甲醇或乙醇。
進(jìn)一步地,所述誘導(dǎo)分化劑是上調(diào)GDF-9、Stra8、SCP3、Mvh、ZP1、ZP2、ZP3基因表達(dá)、下調(diào)Itag6、Itgb1基因表達(dá)的誘導(dǎo)分化劑。
其中,將小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E定向分化為雌性生殖細(xì)胞的具體操作步驟為:
a、取小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E;
b、置于含有的維甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或水合物的培養(yǎng)液中培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間不低于72小時(shí),即得雌性生殖細(xì)胞。
進(jìn)一步地,步驟b所述培養(yǎng)液中維甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或水合物的含量以維甲酸計(jì)為3μg/ml。
“含量以維甲酸計(jì)”,表明維甲酸藥學(xué)上可接受的鹽、酯或水合物在培養(yǎng)液中的含量也通過維甲酸進(jìn)行換算。
進(jìn)一步地,步驟b中,所述培養(yǎng)時(shí)間為72小時(shí)。
本發(fā)明還提供了一種將小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E定向分化為雌性生殖細(xì)胞的方法,它包括如下操作步驟:
a、取小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E;
b、置于含有的維甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或水合物的培養(yǎng)液中培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間不低于72小時(shí),即得雌性生殖細(xì)胞。
進(jìn)一步地,步驟b所述培養(yǎng)液中維甲酸或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或水合物的含量以維甲酸計(jì)為3μg/ml。
進(jìn)一步地,步驟b中,所述培養(yǎng)時(shí)間為72小時(shí)。
本發(fā)明研究表明,RA能誘導(dǎo)MESC-R1/E向雌性生殖細(xì)胞分化,但不能向雄性生殖細(xì)胞分化,可以將RA或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或水合物作為將小鼠胚胎干細(xì)胞R1/E定向分化為雌性生殖細(xì)胞的誘導(dǎo)分化劑使用。
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