[發明專利]具有抗腫瘤活性的PD-L1 IgV親和肽S10

有效

• 申請號: 201410233473.6
• 申請日: 2014-05-29
• 公開（公告）號: CN104086627A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 高艷鋒;劉蓓媛;祁元明;李國棟;周秀曼;李雯雯;周楊
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K38/10;A61P35/00;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 時立新

技術領域

?本發明屬于生物制藥技術領域，具體涉及一種具有抗腫瘤活性多肽產品的篩選、制備及應用，更具體的，本發明涉及一種具有抗腫瘤活性的靶向PD-L1?IgV的親和肽S10產品及其制備和應用。

背景技術

近年來，腫瘤的防控形勢非常嚴峻。隨著臨床診斷、手術治療、化療和放療等水平的提高，使得一部分病人能夠得到早發現、早治療，并且獲得較好的預后，但是，尋找新的治療手段和治療藥物一直是全球范圍內的研究熱點。與傳統的治療方法相比，腫瘤免疫治療能夠激活或者誘導腫瘤患者建立起對腫瘤抗原的特異性免疫應答，清除原發的腫瘤細胞，并且建立免疫記憶，阻止腫瘤的復發和轉移。

在腫瘤免疫治療過程中，負性共刺激分子主要介導免疫耐受和逃逸，而前人在腫瘤免疫治療過程中遇到的最大挑戰就是由于腫瘤免疫耐受和逃逸所導致的療效不佳。因此，探討通過抑制負性共刺激分子所介導的信號通路以打破機體已經建立的對腫瘤細胞的免疫耐受具有重要的理論意義和應用價值。

T細胞的激活需兩個來自細胞外的信號刺激，即淋巴細胞活化的雙信號作用。細胞活化的第一信號主要來自細胞抗原識別受體（TCR?）與MHC?分子抗原肽復合物的特異性結合，此過程為抗原識別。細胞活化的第二信號又稱共刺激信號，是由抗原遞呈細胞（APC）和?細胞表面的粘附分子對提供。這些粘附分子被稱為共刺激分子，是一類細胞膜表面分子，可為?T、B?細胞的活化提供輔助信號，從而調節細胞的增殖、活化及分化。根據產生的效應不同，可將共刺激分子分為正性共刺激分子和負性共刺激分子。正性共刺激分子包括CD28、ICOS、4-1BB等分子，而負性共刺激分子則包括CTLA-4、PD-1、TIM-3等分子。

PD-1?/PD-L1作為B7/CD28家族成員，已被證實通過抑制?T?細胞的活化和增殖來負調控免疫應答，并在調節免疫耐受、腫瘤免疫逃逸中發揮重要作用。因而利用PD-L1的阻斷劑作為腫瘤免疫治療藥物或佐劑具有很好的應用前景和安全性，而現有技術中，尚缺少較好的PD-L1的阻斷劑產品。

發明內容

本發明目的在于提供一種具有較好抗腫瘤活性的靶向PD-L1?IgV的親和肽S10產品，可以特異性利用PD-L1蛋白IgV區（PD-L1?IgV）作為結合靶點，從而最終阻斷PD-1?/PD-L1的活化，解除對T細胞的活化和增殖的抑制作用，從而發揮抗腫瘤作用。

具體而言，本發明采用的技術方案如下：

一種具有抗腫瘤活性靶向PD-L1?IgV親和肽S10，特異性結合于PD-L1?IgV區，其氨基酸序列為：Trp-Ser-His-Gly-Gly-His-Gln-His-Phe-Ile-Arg-Phe,即W-S-H-G-G-H-Q-H-F-I-R-F，分子量為1507.7。

所述具有抗腫瘤活性靶向PD-L1?IgV親和肽S10，添加藥學上可接受的載體或/和添加劑后，在制備抗結腸癌（CT26）藥物中作為主要活性成分發揮作用。

所述具有抗腫瘤活性靶向PD-L1?IgV親和肽S10，通過Fomc固相多肽合成法人工合成制備。

在對靶點進行高通量篩選親和肽過程中，發明人采用了庫容量大、操作簡便的噬菌體展示肽庫技術進行了篩選。噬菌體展示肽庫技術是將外源蛋白或多肽序列插入在M13噬菌體衣殼蛋白pⅢ的N末端，通過蛋白的融合表達將插入的隨機多肽序列展示在噬菌體表面。由于展示多肽位于pⅢ的N末端，這些小肽通常能夠保持較為獨立的空間結構，從而能夠模擬配體與特異性受體靶標相互作用。

本發明通過利用噬菌體展示肽庫篩選技術，以PD-L1?IgV為靶點進行高通量的篩選，人工合成了具有抗腫瘤活性的親和肽S10。發明人進一步通過小鼠體內荷瘤實驗，證明了本發明所提供的靶向PD-L1?IgV親和肽S10具有較好的抗腫瘤活性，能明顯抑制小鼠體內腫瘤的增長，從而為基于PD-L1?的藥物研究和開發提供新的思路和理論基礎。

附圖說明

圖1是ELISA鑒定親和肽S10噬菌體單克隆與PD-L1?IgV蛋白的親和力結果圖；

圖2是親和肽S10的質譜鑒定圖；

圖3是親和肽S10對荷CT26結腸癌小鼠體重變化的影響結果圖；

圖4是親和肽S10對荷CT26結腸癌小鼠瘤體積變化的影響結果圖；

圖5是親和肽S10對荷CT26結腸癌小鼠生存期實驗結果圖。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明做進一步的解釋說明。

實施例1