[發明專利]用于特異性蛋清過敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法

有效

• 申請號: 201410232332.2
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN103995133A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 蔣琳
• 申請（專利權）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/532
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及膠體金標記技術領域，具體地說，涉及一種用于特異性蛋清過敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法。

背景技術

過敏性疾病是當代社會中最常見的一種疾病，它是由廣泛存在的過敏原引起的，我國約5～10％、美國和歐洲約5～25％的人群遭受過過敏性侵擾，其中幼兒和青少年尤為明顯，危害較嚴重。過敏反應(allergy)是免疫機體再次接觸相同變應原時，發生反應過度劇烈而引起的生理功能紊亂和組織損傷的病理性免疫反應。涉及臨床各科，如內科包括支氣管哮喘、過敏性休克、血清病、結締組織病、腎小球腎炎、偏頭痛等，外科包括移植排異反應、耳鼻喉科有過敏性鼻炎、滲出性中耳炎、美尼爾病等，婦產科包括新生兒溶血癥，眼科包括過敏性結膜炎、交感性眼炎，口腔科包括復發性口瘡，皮膚科約半數以上的疾病為過敏反應病，另外還有輸血反應、藥物過敏、過敏性休克等。

2011年4月國家統計局頒布的的調查統計數據顯示，全國城市人口約5.7億，其中有1.5億城市過敏原發病人口，常年處于過敏原狀態的人群達5122萬人。據此估算，中國人口城市變態反應疾病發病率為27％，加上非城市人口，實際中國變態反應疾病發病人數約為3.6億。然而，近十年來，我國過敏原患者的診治率不到1％，近99％的過敏原患者得不到及時的診斷和治療。

據不完全統計，全國15000家縣級以上醫院中引進UniCAP的不足150家，引進率僅占1％。這一比例與其他生化檢測設備(約40～50％)的引進率相比，足以說明過敏原的體外診斷領域存在著巨大發展空間。同時，體外過敏原檢測設備和試劑主要依賴進口，這些原料均采自歐美的進口過敏原試劑，與我國患者的地域差和人種差也有待驗證。基于上述情況，開發一種符合本土化要求的過敏原檢測系統，包括我國自主創新的過敏原檢測儀和試劑在內的研發勢在必行。

過敏原檢測的方法主要分為體內診斷和體外診斷。體內診斷包括皮膚診斷(定性檢查)和激發診斷。常見的皮膚診斷包括皮內實驗、點刺實驗、劃痕實驗、斑貼實驗等。激發診斷包括結膜實驗、鼻實驗、支氣管實驗、食物實驗、藥物激發實驗、物理性激發實驗等。由于體內診斷的影響因素復雜，準確性低，結果只能進行定性，且檢查本身給患者帶來痛苦，對嚴重過敏患者甚至存在生命危險等諸多因素，限制了體內診斷的進一步發展。

體外診斷的原理是基于IgE抗體診斷，在診斷技術上包括免疫印記法、放射變應原吸附診斷(RAST)、熒光酶標法(FEIA)、酶聯免疫法(ELISA)等。

目前，國內常用的臨床檢測過敏原的方法是以皮膚針刺試驗(SPT)為主的體內試驗方法，即用稀釋過敏原液直接點刺皮膚，觀察檢測點是否出現風團或潮紅反應，進行陰性或陽性判定。SPT雖然有簡便，成本低，患者可見結果等優點。但是其結果受諸多因素影響，準確性低，檢查本身給患者尤其是小兒患者帶來痛苦，對嚴重過敏患者甚至有生命危險。國內體外診斷領域處于落后狀態，基本集中在手工操作和半定量半自動分析狀態。存在操作煩瑣、靈敏度和精密度差，測試時間長的缺點。

與體內試驗相比，只需少量血清即可篩選和確定百種過敏原，具有效能參數可靠，不受藥物影響，無全身反應危險等顯著優點。應用比較突出的是PHARDIA?UNICAP系統和SIEMENS診斷系統。PHARDIA?UNICAP系統自70年代問世以來，一直被作為過敏原診斷的金標準。80年代進入中國，一直處于壟斷地位。而SIEMENS診斷系統是過敏原自動化新技術的代表，是近幾年新興的過敏原診斷系統，尚未進入中國市場。

在發達國家，臨床上通行的全自動過敏原檢測是基于酶聯免疫法。常用兩種方法：酶聯免疫熒光測定法和生物素-親和素系統-酶聯免疫法。

酶聯免疫熒光測定法的經典系統是Pharmacia(法瑪西亞)公司的Immuno?CAP檢測系統，它采用纖維素固相載體，該固相載體經溴化氧活化后與過敏原共價結合。過敏原預先結合在固相載體上，加入血樣后37℃孵育,如患者血清中有針對該過敏原的特異性IgE，即形成抗此過敏原抗體復合物。洗脫后加入酶標記的酶標二抗，形成固相載體-過敏原-特異性IgE-酶標二抗的結合物。再次洗脫后加入底物，產生酶催化熒光產物。測定熒光值。根據熒光吸光度的大小換算成特異性IgE含量。