[發(fā)明專利]一種檢測生物分子相互作用的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410232021.6 | 申請日： | 2014-05-28 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN103983555A | 公開（公告）日： | 2014-08-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王琛;杜慧文;楊延蓮 | 申請（專利權(quán)）人： | 國家納米科學(xué)中心 |
| 主分類號(hào)： | G01N15/10 | 分類號(hào)： | G01N15/10 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟;楊晞 |
| 地址： | 100190 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 生物 分子 相互作用 方法 | ||
1.一種檢測生物分子相互作用的方法，包括：
將修飾于微球表面的固定相分子與一系列不同濃度的連接熒光分子的流動(dòng)相分子共同孵育；
使孵育后的樣品通過流式細(xì)胞儀，統(tǒng)計(jì)不同濃度的流動(dòng)相分子條件下的不同表面熒光強(qiáng)度的微球的數(shù)目；
根據(jù)所述統(tǒng)計(jì)的微球的數(shù)目，擬合出所述固定相分子與所述流動(dòng)相分子相互作用的平衡結(jié)合常數(shù)和/或平衡解離常數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述固定相分子選自多肽、蛋白質(zhì)、DNA、RNA或寡核苷酸；
優(yōu)選地，所述流動(dòng)相分子選自多肽、蛋白質(zhì)、DNA、RNA或寡核苷酸；
優(yōu)選地，所述固定相分子選自多肽和/或蛋白質(zhì)，所述流動(dòng)相分子選自多肽和/或蛋白質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述微球的材料選自聚合物、硅、二氧化硅、金屬、金屬氧化物、玻璃和石英中的任意一種或至少兩種組成的復(fù)合材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述熒光分子選自異硫氰酸熒光素、3H-吲哚菁類染料、藻紅蛋白、多甲藻葉綠蛋白或別藻青蛋白，優(yōu)選異硫氰酸熒光素。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述修飾于微球表面的固定相分子是通過生物素-鏈霉親和素之間的強(qiáng)相互作用、共價(jià)連接、自組裝或靜電吸附方式將所述固定相分子固定于所述微球表面的；
優(yōu)選地，所述修飾于微球表面的固定相分子是通過生物素-鏈霉親和素之間的強(qiáng)相互作用將所述固定相分子固定于所述微球表面的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述微球?yàn)殒溍褂H和素包被的微球，所述固定相分子為生物素標(biāo)記的生物分子；
優(yōu)選地，所述微球?yàn)楸砻嫘揎楁溍褂H和素的聚苯乙烯微球。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述微球?yàn)楸砻嫘揎楁溍褂H和素的聚苯乙烯微球；所述固定相分子為生物素標(biāo)記的多肽和/或蛋白質(zhì)；所述流動(dòng)相分子為連接異硫氰酸熒光素的多肽和/或蛋白質(zhì)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述孵育的溫度條件為35～40℃，優(yōu)選為37℃。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述生物分子相互作用具體是生物分子或小分子與靶蛋白之間的相互作用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的檢測生物分子相互作用的方法，其特征在于，所述擬合采用吸附公式：進(jìn)行；其中，θ為表面覆蓋率，Ca為流動(dòng)相分子的濃度，KA為固定相分子和流動(dòng)相分子相互作用的平衡結(jié)合常數(shù)，n為流動(dòng)相分子與固定相分子相互作用的化學(xué)計(jì)量數(shù)之比。
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