[發(fā)明專(zhuān)利]用于特異性堅(jiān)果類(lèi)過(guò)敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410231999.0
• 申請(qǐng)日: 2014-05-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103995114A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣琳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/558
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及膠體金標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種用于特異性堅(jiān)果類(lèi)過(guò)敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法。

背景技術(shù)

過(guò)敏性疾病是當(dāng)代社會(huì)中最常見(jiàn)的一種疾病，它是由廣泛存在的過(guò)敏原引起的，我國(guó)約5～10％、美國(guó)和歐洲約5～25％的人群遭受過(guò)過(guò)敏性侵?jǐn)_，其中幼兒和青少年尤為明顯，危害較嚴(yán)重。過(guò)敏反應(yīng)(allergy)是免疫機(jī)體再次接觸相同變應(yīng)原時(shí)，發(fā)生反應(yīng)過(guò)度劇烈而引起的生理功能紊亂和組織損傷的病理性免疫反應(yīng)。涉及臨床各科，如內(nèi)科包括支氣管哮喘、過(guò)敏性休克、血清病、結(jié)締組織病、腎小球腎炎、偏頭痛等，外科包括移植排異反應(yīng)、耳鼻喉科有過(guò)敏性鼻炎、滲出性中耳炎、美尼爾病等，婦產(chǎn)科包括新生兒溶血癥，眼科包括過(guò)敏性結(jié)膜炎、交感性眼炎，口腔科包括復(fù)發(fā)性口瘡，皮膚科約半數(shù)以上的疾病為過(guò)敏反應(yīng)病，另外還有輸血反應(yīng)、藥物過(guò)敏、過(guò)敏性休克等。

2011年4月國(guó)家統(tǒng)計(jì)局頒布的的調(diào)查統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全國(guó)城市人口約5.7億，其中有1.5億城市過(guò)敏原發(fā)病人口，常年處于過(guò)敏原狀態(tài)的人群達(dá)5122萬(wàn)人。據(jù)此估算，中國(guó)人口城市變態(tài)反應(yīng)疾病發(fā)病率為27％，加上非城市人口，實(shí)際中國(guó)變態(tài)反應(yīng)疾病發(fā)病人數(shù)約為3.6億。然而，近十年來(lái)，我國(guó)過(guò)敏原患者的診治率不到1％，近99％的過(guò)敏原患者得不到及時(shí)的診斷和治療。

據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全國(guó)15000家縣級(jí)以上醫(yī)院中引進(jìn)UniCAP的不足150家，引進(jìn)率僅占1％。這一比例與其他生化檢測(cè)設(shè)備(約40～50％)的引進(jìn)率相比，足以說(shuō)明過(guò)敏原的體外診斷領(lǐng)域存在著巨大發(fā)展空間。同時(shí)，體外過(guò)敏原檢測(cè)設(shè)備和試劑主要依賴(lài)進(jìn)口，這些原料均采自歐美的進(jìn)口過(guò)敏原試劑，與我國(guó)患者的地域差和人種差也有待驗(yàn)證。基于上述情況，開(kāi)發(fā)一種符合本土化要求的過(guò)敏原檢測(cè)系統(tǒng)，包括我國(guó)自主創(chuàng)新的過(guò)敏原檢測(cè)儀和試劑在內(nèi)的研發(fā)勢(shì)在必行。

過(guò)敏原檢測(cè)的方法主要分為體內(nèi)診斷和體外診斷。體內(nèi)診斷包括皮膚診斷(定性檢查)和激發(fā)診斷。常見(jiàn)的皮膚診斷包括皮內(nèi)實(shí)驗(yàn)、點(diǎn)刺實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、斑貼實(shí)驗(yàn)等。激發(fā)診斷包括結(jié)膜實(shí)驗(yàn)、鼻實(shí)驗(yàn)、支氣管實(shí)驗(yàn)、食物實(shí)驗(yàn)、藥物激發(fā)實(shí)驗(yàn)、物理性激發(fā)實(shí)驗(yàn)等。由于體內(nèi)診斷的影響因素復(fù)雜，準(zhǔn)確性低，結(jié)果只能進(jìn)行定性，且檢查本身給患者帶來(lái)痛苦，對(duì)嚴(yán)重過(guò)敏患者甚至存在生命危險(xiǎn)等諸多因素，限制了體內(nèi)診斷的進(jìn)一步發(fā)展。

體外診斷的原理是基于IgE抗體診斷，在診斷技術(shù)上包括免疫印記法、放射變應(yīng)原吸附診斷(RAST)、熒光酶標(biāo)法(FEIA)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)等。

目前，國(guó)內(nèi)常用的臨床檢測(cè)過(guò)敏原的方法是以皮膚針刺試驗(yàn)(SPT)為主的體內(nèi)試驗(yàn)方法，即用稀釋過(guò)敏原液直接點(diǎn)刺皮膚，觀察檢測(cè)點(diǎn)是否出現(xiàn)風(fēng)團(tuán)或潮紅反應(yīng)，進(jìn)行陰性或陽(yáng)性判定。SPT雖然有簡(jiǎn)便，成本低，患者可見(jiàn)結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)。但是其結(jié)果受諸多因素影響，準(zhǔn)確性低，檢查本身給患者尤其是小兒患者帶來(lái)痛苦，對(duì)嚴(yán)重過(guò)敏患者甚至有生命危險(xiǎn)。國(guó)內(nèi)體外診斷領(lǐng)域處于落后狀態(tài)，基本集中在手工操作和半定量半自動(dòng)分析狀態(tài)。存在操作煩瑣、靈敏度和精密度差，測(cè)試時(shí)間長(zhǎng)的缺點(diǎn)。

與體內(nèi)試驗(yàn)相比，只需少量血清即可篩選和確定百種過(guò)敏原，具有效能參數(shù)可靠，不受藥物影響，無(wú)全身反應(yīng)危險(xiǎn)等顯著優(yōu)點(diǎn)。應(yīng)用比較突出的是PHARDIA?UNICAP系統(tǒng)和SIEMENS診斷系統(tǒng)。PHARDIA?UNICAP系統(tǒng)自70年代問(wèn)世以來(lái)，一直被作為過(guò)敏原診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。80年代進(jìn)入中國(guó)，一直處于壟斷地位。而SIEMENS診斷系統(tǒng)是過(guò)敏原自動(dòng)化新技術(shù)的代表，是近幾年新興的過(guò)敏原診斷系統(tǒng)，尚未進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)。

在發(fā)達(dá)國(guó)家，臨床上通行的全自動(dòng)過(guò)敏原檢測(cè)是基于酶聯(lián)免疫法。常用兩種方法：酶聯(lián)免疫熒光測(cè)定法和生物素-親和素系統(tǒng)-酶聯(lián)免疫法。

酶聯(lián)免疫熒光測(cè)定法的經(jīng)典系統(tǒng)是Pharmacia(法瑪西亞)公司的Immuno?CAP檢測(cè)系統(tǒng)，它采用纖維素固相載體，該固相載體經(jīng)溴化氧活化后與過(guò)敏原共價(jià)結(jié)合。過(guò)敏原預(yù)先結(jié)合在固相載體上，加入血樣后37℃孵育,如患者血清中有針對(duì)該過(guò)敏原的特異性IgE，即形成抗此過(guò)敏原抗體復(fù)合物。洗脫后加入酶標(biāo)記的酶標(biāo)二抗，形成固相載體-過(guò)敏原-特異性IgE-酶標(biāo)二抗的結(jié)合物。再次洗脫后加入底物，產(chǎn)生酶催化熒光產(chǎn)物。測(cè)定熒光值。根據(jù)熒光吸光度的大小換算成特異性IgE含量。