[發(fā)明專利]用于特異性真菌類過敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法

有效

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• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN103995117A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設計）人: 蔣琳
• 申請（專利權）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/564
• 分類號: G01N33/564;G01N33/544
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種用于特異性真菌類過敏原IgE篩查的試紙條，其特征在于，所述試紙條包被有膠體金標記的真菌類抗原。

2.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條為包被有膠體金標記的真菌類抗原的硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

3.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條的pH值為8.5-10，膠體金顆粒與真菌類抗原之間的摩爾比為10-20:1。

4.根據權利要求1-3任一項所述的試紙條，其特征在于，真菌類包括但不限于曲霉、青霉、頭孢霉、木霉、玉米黑粉菌、小麥黑粉菌、毛霉、根霉、交聯孢霉、酵母菌、紅酵母、假絲酵母。

5.根據權利要求1-3任一項所述的試紙條，其特征在于，所述真菌為鏈格孢霉(Fungi?Imperficti)，鏈格孢霉抗原的制備方法為：取鏈格孢霉菌絲50g，用200mL無水乙醇進行脫脂，重復脫脂5-6次，脫脂結束后進行離心，離心后的物質置于通風櫥中，將殘余的乙醇揮發(fā)完全，即得鏈格孢霉抗原。

6.權利要求1-5任一項所述試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)真菌類抗原溶液的制備：將待標記的真菌類抗原溶解在0.9％pH7.0的NaCl溶液中，使其終濃度為50-500μg/ml，于4℃透析過夜，以除去鹽離子，即得真菌類抗原溶液；

2)膠體金溶液的制備：用0.1M?K₂CO₃溶液和0.1M?HCl調0.01％HAuCl₄膠體金溶液的pH值至8.5-10，使膠體金的粒徑達到40-60nm，濃度達到0.5-2％，即得膠體金溶液；

3)膠體金與真菌類抗原的結合：用0.1M?K₂CO₃溶液調步驟1)的抗原溶液的pH值至8.5-10，邊攪拌邊向其中加入步驟2)的膠體金溶液，抗原溶液與膠體金溶液的體積比為1-10:100，同時加入穩(wěn)定劑以防止真菌類抗原與膠體金顆粒聚合沉淀，即得膠體金-真菌類抗原結合物；所述穩(wěn)定劑為BSA和分子量20KD的聚乙二醇，二者終濃度分別為1％和0.1％；

4)膠體金標記的真菌類抗原的純化：將步驟3)中制備的膠體金-真菌類抗原結合物經1500r/min離心20min；收集沉淀溶于穩(wěn)定劑中，使其濃度達到5-30％；然后加至Sephacryl?S-400層析柱上進行純化，將純化的膠體金標記的真菌類抗原溶液過濾除菌，4℃保存；所述穩(wěn)定劑為1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇溶液；

5)試紙條的包被：將步驟4)中制備的膠體金標記的動物毛皮屑抗原溶液噴線于試紙條上，干燥后即得用于特異性動物毛皮屑過敏原IgE篩查的試紙條成品。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟4)中加樣量為Sephacryl?S-400層析柱體積的1/10，以穩(wěn)定劑作為洗脫液，流速為5-10ml/h；所述穩(wěn)定劑為1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇溶液。