[發明專利]茄子花青素合成相關基因SmMYB1及其重組表達載體和在培育紫色番茄中的應用

有效

• 申請號: 201410230344.1
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN103966235A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 胡宗利;張彥杰;陳國平;王蘇蘇;劉霞;褚桂花
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;C12N1/21;A01H5/00;C12R1/01
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 王貴君

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，涉及茄子花青素合成相關基因SmMYB1和含有該基因的重組表達載體，還涉及該基因在培育紫色番茄中的應用和方法。

背景技術

番茄作為一種世界范圍內廣泛栽培的農作物，其果實一直是廣受大眾所喜愛的蔬菜和水果。花色苷作為一種廣泛存在于植物體內的水溶性類黃酮類色素，越來越多的研究證明花色苷不僅在植物應對不良環境(紫外照射、低溫、干旱及病原菌入侵)時發揮積極作用，同時花色苷也對人類大量的慢性疾病(心血管病和腫瘤)的治療有一定的幫助作用。大量資料證實，規律性的食用花色苷含量較高的食物對于人體的保健有著重要的價值。番茄作為一種在人們餐桌上出現頻率較高的水果或蔬菜，自然栽培的番茄果實中的花色苷含量卻微乎其微。通過基因工程的方法，我們將調控茄子果實花色苷合成的轉錄因子異源表達于與番茄中，獲得了紫色的番茄植株及果實。番茄果實的色澤一直是育種工作者關注的重要問題，我們通過異源表達外源基因的方法，不僅改變了整個番茄植株的顏色，同時還改變了果實的顏色。傳統的育種方法周期長、耗資多且效果不穩定。近年來，隨著基因工程的迅速發展和轉基因技術的日益完善，基因工程技術在培育優良作物品種方面顯示了極大的潛力。基因工程技術勢必會越來越廣泛的應用于番茄品種的改良和育種當中。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供茄子花青素合成相關基因SmMYB1；本發明的目的之二在于提供含有茄子花青素合成相關基因SmMYB1的重組表達載體；本發明的目的之三載體提供含有重組表達載體的微生物轉化體；本發明的目的之四在于提供茄子花青素合成相關基因SmMYB1在培育紫色番茄品種中的應用；本發明的目的之五在于提供茄子花青素合成相關基因SmMYB1在提高番茄果實中花色苷中的應用；本發明的目的之六在于提供培育紫色番茄品種的方法。

為實現上述發明目的，本發明提供如下技術方案：

1.茄子花青素合成相關基因SmMYB1，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.含有權利要求1所述茄子花青素合成相關基因SmMYB1的重組表達載體。

優選的，所述重組表達載體是在pBI121載體的Sac I和Xba I酶切位點之間連入如SEQ ID No.3所示核苷酸序列。

3.含有所述重組表達載體的微生物轉化體。

優選的，所述微生物轉化體為根癌農桿菌LBA4404，也可以選擇其他的農桿菌。

4.所述茄子花青素合成相關基因SmMYB1在培育紫色番茄品種中的應用。

5.所述茄子花青素合成相關基因SmMYB1在提高番茄果實花色苷含量中的應用。

6.培育紫色番茄品種的方法，包括如下步驟：

a.構建含如SEQ ID No.3所示核苷酸序列的重組表達載體，然后轉化微生物轉化體，制得工程菌；

b.將步驟a所得工程菌轉化番茄外植體，然后在含30g/L的蔗糖、1mg/L吲哚乙酸、1.75mg/L玉米素、pH為5.8的MS固體培養基中于25±2℃、黑暗下共培養48小時；再轉入含有30g/L的蔗糖、1.0mg/L吲哚乙酸、1.75mg/L玉米素、500mg/L羧芐青霉素和50mg/L卡那霉素、pH為5.8的MS固體培養基中，在25±2℃、光周期16h/d、光照強度1000-2000lx條件下培養至長出再生芽；待芽長至2-3cm時切下再生芽，轉入含有30g/L的蔗糖、250mg/L羧芐青霉素和50mg/L卡那霉素、pH為5.8的MS固體培養基中，在25±2℃、光周期16h/d、光照強度1000-2000lx條件下培養至生根，即得紫色番茄品種。

優選的，所述重組表達載體的的構建方法為：用SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示序列為引物克隆攜帶酶切位點的茄子花青素合成相關基因SmMYB1，將Sac I和Xba I酶切后再與經同樣雙酶切的pBI121載體連接。