[發明專利]神經生長因子緩釋納米載體的制備及應用

無效

• 申請號: 201410230303.2
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN104027793A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 鄭良榮;趙文婷;張媛媛;孫澤瑋;韓飛
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61K47/34;A61K9/51;A61P3/10;A61P9/10
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬于藥物制備，具體涉及聚乳酸-羥基乙酸共聚物包裹的神經生長因子緩釋系統（納米載體）及其制備方法，以及在制備糖尿病合并冠心病藥物中的應用，適合于制備改善糖尿病心臟自主神經和感覺神經功能的藥物的場合。

背景技術

神經生長因子（NGF）是神經營養因子中最早被發現，目前研究最為透徹的，具有神經元營養和促突起生長雙重生物學功能的一種神經細胞生長調節因子，它對中樞及周圍神經元的發育、分化、生長、再生和功能特性的表達均具有重要的調控作用。神經損傷后，NGF受體增加,反映在損傷修復過程中對NGF的需求。靶區NGF的水平也明顯升高。目前應用于臨床的是注射用鼠神經生長因子，用于促進神經損傷的恢復，例如：視神經炎、脊髓損傷、坐骨神經痛、腦萎縮、新生兒缺血缺氧性腦病、糖尿病末梢神經炎等。目前臨床采用肌肉注射，一日一次，療效確切。但由于其在體內消除半衰期較短，約為2.5小時，體內平均滯留時間為3.5小時，故造成血藥濃度不穩定，不能較長時間維持有效血藥濃度，治療效果不確切，其主要副作用為注射部位局部疼痛，偶見蕁麻疹。

聚乳酸-羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic?acid)，PLGA)由兩種單體——乳酸（LA）和羥基乙酸（GA）隨機聚合而成，是一種可降解的功能高分子有機化合物，具有良好的生物相容性、無毒、良好的成囊和成膜的性能，被廣泛應用于制藥、醫用工程材料和現代化工業領域。在美國PLGA通過FDA認證，被正式作為藥用輔料收錄進美國藥典。?不同的單體比例可以制備出不同類型的PLGA。所有的PLGA都是非定型的，其玻璃化溫度在40-60?°C之間。純的乳酸或羥基乙酸聚合物比較難溶，與之不同的是，PLGA展現了更為廣泛的溶解性，它能夠溶解于更多更普遍的溶劑當中，如：氯化溶劑類，四氫呋喃，丙酮或乙酸乙酯等。破壞酯鍵會導致PLGA的降解，降解程度隨單體比不同而有差異，乙交酯比例越大越易降解。也存在特例，當兩種單體比為50：50時，降解的速度會更快，差不多需要兩個月。PLGA的降解產物是乳酸和羥基乙酸，同時也是人代謝途徑的副產物，所以當它應用在醫藥和生物材料中時不會有毒副作用。通過調整單體比，進而改變PLGA的降解時間，因此可以根據藥物的性質和用途調整乳酸和羥基乙酸之間的比例，制備具有特定功效的納米制劑，所制得的納米粒子粒徑從100納米到300納米不等，可用于肌肉注射和靜脈注射。

心血管病作為危害人類健康的“第一殺手”，已波及全球，而冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（以下簡稱冠心?。┦切难芗膊≈邪l病率、死亡率非常高的疾病。研究顯示，冠心病患者60%～80%存在血糖升高。循證醫學證明，糖尿病患者80%死于冠心病，糖尿病是冠心病的高危癥。早期預防和治療糖尿病合并冠心病具有重大的意義。由于糖尿病性神經病變，患者的神經末梢受損時，痛閾升高，導致即使發生了嚴重的心肌缺血，疼痛也較輕微而不典型，甚至沒有心絞痛癥狀，引起無痛性心肌梗死，這類患者因為沒有明顯的胸痛癥狀而易被誤診或延誤病情而導致病情加重、死亡率增加。現有治療方法多從降血糖、降血脂的角度出發，但治療效果并不樂觀。國外有文獻，將NGF-腺病毒轉染至心肌細胞，對其缺血損傷有明顯的保護作用。基于上述理論基礎，有待于將其應用于糖尿病合并冠心病的治療中。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種神經生長因子緩釋納米載體的制備方法，通過以下步驟實現：?

（1）制備內水相、油相和外水相：內水相（W1）為NGF加入體積百分數5%?聚乙二醇（PEG）；油相（O）為PLGA溶于二氯甲烷與丙酮體積比為3:1的混合溶液，PLGA濃度為1.25%（1.25g/100ml）；外水相（W₂）為體積百分數為0.7%的聚乙烯醇（?PVA）水溶液；

（2）制備包裹NGF的PLGA微球：將所述內水相（W1）加入油相（O）中，100W（瓦特）冰水中超聲1min制備油包水型乳液（W1/O），將(W1/O)?乳液加入含0.7%?PVA的水溶液中，(W1/O)?乳液與外水相（W2）體積比為1：5；55W冰水中超聲20min，得到水包油包水型復乳（W1/O/W2），將均勻的復乳倒入離心管中，51攝氏度真空旋蒸25min，以揮發溶劑；?

（3）離心、沖洗、干燥、冷藏包裹NGF的PLGA微球：將步驟（2）乳液收集后，20000rpm，4°C離心20min，用蒸餾水沖洗沉淀3次洗凈納米粒表面的PVA以及游離的蛋白，然后收集納米粒，-20℃冷凍干燥24h，冰凍干燥后，將凍干的包裹NGF的PLGA納米微球儲存于2-8℃冰箱中。