[發(fā)明專利]參與枇杷果實(shí)木質(zhì)素合成調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子EjMYB1及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410230291.3
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號(hào): CN104031922A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 殷學(xué)仁;徐倩;李鮮;陳昆松
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C12N15/10;C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物分子生物技術(shù)和基因工程領(lǐng)域，涉及一個(gè)參與枇杷果實(shí)木質(zhì)素合成調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子EjMYB1。

背景技術(shù)

MYB是一類存在于真核生物中的功能多樣的轉(zhuǎn)錄因子。MYB含有高度保守的DNA結(jié)構(gòu)域，稱為MYB結(jié)構(gòu)域，是由52個(gè)氨基酸組成的4個(gè)不完全重復(fù)氨基酸序列，根據(jù)MYB結(jié)構(gòu)域數(shù)量的不同可以分為幾類，其中R2R3-MYB為在植物中研究十分廣泛的一類，在擬南芥中有126個(gè)R2R3-MYB成員，并細(xì)分為22個(gè)亞家族。R2R3-MYB參與植物特異的生長過程，初生和次生代謝、細(xì)胞建成、發(fā)育過程和響應(yīng)生物與非生物脅迫等。

木質(zhì)素是芳香族類的雜聚物，是次生細(xì)胞壁的主要組成之一。木質(zhì)素可參與植株機(jī)械支持、維管系統(tǒng)中的水分和溶質(zhì)運(yùn)輸、防御病蟲害等生命活動(dòng)。然而，在有些植物中，木質(zhì)素卻是影響其品質(zhì)的主要因素之一，例如，作為生物能源的柳枝稷，次生細(xì)胞壁的另兩個(gè)組成成分纖維素、木聚糖是作為發(fā)酵的主要碳源，而木質(zhì)素則會(huì)影響其生物轉(zhuǎn)化過程；作為果蔬類的枇杷、山竹、竹筍、芹菜等，木質(zhì)化則嚴(yán)重影響了其食用品質(zhì)與貯藏品質(zhì)。

枇杷（Eriobotrya?japonica?Lindl.）屬于薔薇科，為非躍變型果實(shí)，可分為紅肉和白肉兩大類型。與其他果實(shí)采后出現(xiàn)軟化的現(xiàn)象不同，紅肉枇杷果實(shí)在采后會(huì)出現(xiàn)木質(zhì)化現(xiàn)象，使果實(shí)硬度上升，粗糙少汁，風(fēng)味變淡，商品價(jià)值下降。因此，分析木質(zhì)化產(chǎn)生的調(diào)控機(jī)制，在枇杷果實(shí)木質(zhì)化研究中具有重大意義。在轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平上，多個(gè)MYB成員是在木質(zhì)素合成途徑中起轉(zhuǎn)錄激活的作用。擬南芥中先后發(fā)現(xiàn)AtMYB46、AtMYB83參與次生細(xì)胞壁的形成，AtMYB58、AtMYB63為特異參與木質(zhì)素的合成調(diào)控。另外，木本植物中，火炬松的PtMYB1、PtMYB4、PtMYB8，桉樹的EgMYB2、楊樹的PtrMYB3、PtrMYB20都參與木質(zhì)素單體的合成。果樹研究上，并未涉及類似MYB的研究，枇杷作為木質(zhì)化現(xiàn)象典型的果實(shí)開展此類研究的是十分必要和重要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一個(gè)參與枇杷果實(shí)木質(zhì)素合成調(diào)控的MYB轉(zhuǎn)錄因子EjMYB1，其核苷酸序列編號(hào)為：SEQ?ID?N0：1。其與擬南芥中特異調(diào)控木質(zhì)素合成的AtMYB58相似度高，基因表達(dá)模式與枇杷木質(zhì)素的合成呈正相關(guān)，可正向誘導(dǎo)木質(zhì)素合成基因EjPAL1、Ej4CL1和Ej4CL5的啟動(dòng)子活性。轉(zhuǎn)錄因子EjMYB1具體通過以下步驟獲得：

以擬南芥中特異調(diào)控木質(zhì)素合成的AtMYB58氨基酸序列為參考序列，在薔薇科數(shù)據(jù)庫中（http://www.rosaceae.org）進(jìn)行比對，選擇匹配度最高的三條序列，MDP0000133542(chr5:11008894..11011881),MDP0000435315(chr3:7586759..7588715)和MDP0000230141(chr3:7611165..7613121)，根據(jù)這三條序列在蘋果基因組上的位置，獲得相應(yīng)核苷酸序列；根據(jù)這三條序列設(shè)計(jì)引物，以枇杷cDNA為模板，獲得以MDP0000230141（chr3:7611165..7?613121）為序列的枇杷序列SEQ：NO.?1，命名為EjMYB1。

為了進(jìn)一步確定序列SEQ：NO.?1的編碼區(qū)，對其進(jìn)行RACE擴(kuò)增。根據(jù)SEQ：NO.?1序列設(shè)計(jì)RACE引物SEQ：NO.?2-5，以枇杷RACE?cDNA作為模板，參照SMART?RACE?cDNA?Amplification（Clontech）說明，進(jìn)一步確定枇杷上此序列的編碼區(qū)，獲得包含非翻譯區(qū)的SEQ：NO.?6。

1.?EjMYB1表達(dá)量與枇杷木質(zhì)素合成呈正相關(guān)：