[發明專利]一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法

在審

• 申請號: 201410229192.3
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN103969373A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 婁婷婷;葛寶坤;陳其勇;章驊;趙孔祥
• 申請（專利權）人: 天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1. 一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法,其特征在于，包括以下步驟：

1）制備葉綠素銅鈉標準工作溶液、加標用標準使用液以及模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油并提取其中的葉綠素銅鈉，制備葉綠素銅鈉提取液；

2）采用高效液相色譜對待測溶液進行檢測，采用保留時間定性、峰面積定量；

3）根據標準曲線方程，對橄欖油中葉綠素銅鈉的含量進行準確定量分析。

2.根據權利要求1中所述的一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，其特征在于該檢測方法包括以下步驟：

步驟一：制備標準工作溶液、加標用標準使用液和模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油：所述標準工作溶液為由葉綠素銅鈉配備而成的標準工作溶液和橄欖油標準工作溶液；所述模擬摻入葉綠素銅鈉的橄欖油由空白橄欖油樣品添加加標用葉綠素銅鈉使用液獲得；所述空白橄欖油樣品為未受葉綠素銅鈉污染的橄欖油；

步驟二：采用高效液相色譜對步驟一的溶液分別進行測定；分別以標準工作溶液中葉綠素a銅鈉的濃度x₁為橫坐標，以對應的測得的峰面積y₁為縱坐標；葉綠素b銅鈉的濃度x₂ 為橫坐標，以對應的測得的峰面積y₂為縱坐標，繪制標準工作溶液回歸曲線，根據曲線得到的線性方程y₁=a₁x₁+b₁和y₂=a₂x₂+b₂，分別計算出回歸曲線的斜率a₁、a₂ 和截距b₁、b₂ ；

步驟三：根據公式x₁=（y₁-b）/a和x₂=（y₂-b）/a計算葉綠素a銅鈉和葉綠素b銅鈉濃度x₁和x₂，葉綠素銅鈉濃度x=x₁+x₂；其中y₁和y₂分別為測得的摻入葉綠素銅鈉橄欖油中葉綠素a銅鈉和葉綠素b銅鈉的峰面積。

3.根據權利要求1 或2 所述的一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，其特征在于色譜條件為：

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱或性能相當者；

柱溫：20-40℃ ；

檢測波長：400-410 nm ；

流動相：有機相和醋酸鹽緩沖液組成；

所述流動相中醋酸鹽緩沖液的濃度為0.1-0.2mol/L，pH 為7.0~8.0，有機相為甲醇或丙酮。

4.根據權利要求1 或2 所述的一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，其特征在于：所述步驟一中，標準工作溶液的制備方法具體為：準備葉綠素銅鈉標準儲備溶液：準確稱取葉綠素銅鈉的標準品并利用合適的溶劑配置標準溶液，并在溶液中加入適量保護劑，避光、4℃保存。

5.根據權利要求1 或2 所述的一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，其特征在于：所述步驟一中，模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油的制備及葉綠素銅鈉的提取方法為：（a）將加標用葉綠素銅鈉標準使用液加入到空白橄欖油中得到摻入葉綠素銅鈉橄欖油模擬物；（b）取1-2g模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油于離心管中，加入混合提取液5-10mL，充分混勻，渦旋振提5-10min；在4℃、10000轉/min離心5min，取上清液做為測試液，進HPLC分析測試。

6.根據權利要求2 所述的一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，其特征在于：所述步驟一中，模擬摻入葉綠素銅鈉橄欖油和空白試液均平行制備兩份，然后進行步驟二和步驟三，若兩次獨立測試結果的絕對差值不超過其算術平均值的20%，則測試準確。

7.根據權利要求1 或2 所述的一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，其特征在于：所述步驟一中，橄欖油加標用標準工作溶液的制備方法為：固體標準品用少許甲醇溶解，再用四氫呋喃定容，即為樣品加標用標準溶液；用四氫呋喃按照所需的稀釋液濃度大小進行稀釋，再按照所需的加標濃度的大小進行樣品加標。

8.權利要求3所述的一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，其特征在于：所述保護劑為亞硫酸氫鈉；配置標準品所用試劑為純水和有機相的混合液。

9.權利要求1或2所述的一種橄欖油中葉綠素銅鈉的測定方法，其特征在于：所述葉綠素銅鈉的含量為葉綠素a銅鈉和葉綠素b銅鈉含量的加和。