[發(fā)明專利]一種同時(shí)檢測(cè)病毒抗原和抗體的膠體金免疫層析試紙條

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410228165.4
• 申請(qǐng)日: 2014-05-27
• 公開（公告）號(hào): CN103983776A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣興宇;曹豐晶;張偉;陳翊平;趙大龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家納米科學(xué)中心
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯桂麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種同時(shí)檢測(cè)病毒抗原及其特異性免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)的膠體金免疫層析試紙條。

背景技術(shù)

流行性感冒(簡(jiǎn)稱流感)是流感病毒引起的急性呼吸道感染，也是一種傳染性強(qiáng)、傳播速度快的疾病。其主要通過空氣中的飛沫、人與人之間的接觸或與被污染物品的接觸傳播。典型的臨床癥狀是：急起高熱、全身疼痛、顯著乏力和輕度呼吸道癥狀。一般，秋冬季節(jié)是其高發(fā)期，所引起的并發(fā)癥和死亡現(xiàn)象非常嚴(yán)重。該病是由流感病毒引起流行性感冒，病毒屬正粘病毒科，直徑80～120nm，球形或絲狀。流感病毒可分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，甲型流感病毒經(jīng)常發(fā)生抗原變異，傳染性大，傳播迅速，極易發(fā)生大范圍流行。甲型H1N1也就是一種甲型流感病毒，本病具有自限性，但在嬰幼兒、老年人和存在心肺基礎(chǔ)疾病的患者容易并發(fā)肺炎等嚴(yán)重并發(fā)癥而導(dǎo)致死亡。正確診斷此病原體對(duì)迅速治愈具有十分重要的意義。

甲型流感病毒依據(jù)流感病毒血凝素蛋白(HA)的不同可分為1-16種亞型，根據(jù)病毒神經(jīng)氨酸酶蛋白(NA)的不同可分為1-9種亞型，HA不同亞型可以與NA的不同亞型相互組合形成不同的流感病毒。

免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)是人類或者動(dòng)物體內(nèi)最重要的兩種抗體。如圖1所示，當(dāng)機(jī)體感染流感病毒之后，起初未來得及引起機(jī)體的免疫反應(yīng)，因此，此時(shí)只能檢測(cè)到病毒抗原。之后，引起機(jī)體的免疫反應(yīng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體IgM和IgG抗體。如圖2所示，當(dāng)機(jī)體感染流感病毒后，在體內(nèi)最早出現(xiàn)的是流感病毒的IgM抗體，之后再出現(xiàn)流感病毒的特異性IgG抗體。因此，通過檢測(cè)機(jī)體內(nèi)病毒抗原，及其特異性的IgM抗體和IgG抗體的存在與否，可以診斷機(jī)體對(duì)流感病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)。若只能檢測(cè)到病毒抗原，說明機(jī)體剛感染幾天，若血清內(nèi)檢測(cè)出病毒特異性的IgM抗體，證明該機(jī)體有近期流感的發(fā)生，但由于IgM半衰期較短，IgM的檢測(cè)陰性并不能證明機(jī)體未受到流感的感染，還需要檢測(cè)半衰期較長(zhǎng)、含量最高的IgG抗體，以明確診斷。而病毒抗原在機(jī)體內(nèi)存在一個(gè)最高值，濃度也會(huì)隨時(shí)間的變化而變化，會(huì)存在檢測(cè)不到的情況。因此，通過同時(shí)檢測(cè)流感病毒抗原及其特異性的IgM抗體和IgG抗體，能夠準(zhǔn)確的判斷該機(jī)體的免疫學(xué)反應(yīng)狀態(tài)，從而根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，給出準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，最終給以一定的臨床治療。遺憾的是，目前并沒有同時(shí)檢測(cè)流感病毒抗原及其特異性的IgM抗體和IgG抗體的試紙條。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種同時(shí)檢測(cè)病毒抗原和抗體的膠體金免疫層析試紙條。所述膠體金免疫層析試紙條不僅能在一次檢測(cè)中同時(shí)檢測(cè)病毒抗原及其特異性IgM抗體和IgG抗體，而且能夠避免漏檢，可以大大縮短檢測(cè)時(shí)間和降低檢測(cè)費(fèi)用，達(dá)到現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的目的。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

一種同時(shí)檢測(cè)病毒抗原和抗體的膠體金免疫層析試紙條，包括并列設(shè)置的第一膠條和第二膠條；所述第一膠條包括順次搭接的第一樣品墊、第一結(jié)合物墊、第一硝酸纖維素膜和第一吸水紙，其中所述第一結(jié)合物墊上涂覆有病毒抗體標(biāo)記的膠體金，所述第一硝酸纖維素膜上包被有病毒抗體作為第一檢測(cè)線并包被有抗膠體金上病毒抗體的抗體作為質(zhì)控線；所述第二膠條包括順次搭接的第二樣品墊、第二結(jié)合物墊、第二硝酸纖維素膜和第二吸水紙，其中所述第二結(jié)合物墊上涂覆有病毒抗原標(biāo)記的膠體金，所述第二硝酸纖維素膜上包被有抗人IgG抗體作為第二檢測(cè)線并包被有抗人IgM抗體作為第三檢測(cè)線。

作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，所述膠體金上病毒抗體為鼠源性抗體，所述作為質(zhì)控線的抗體為羊抗鼠IgG。鼠源性抗體是目前商業(yè)化抗體中最常見的抗體形式，來源廣泛，成本較低，并且特異性和穩(wěn)定性好。所述病毒抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體，制備所述多克隆抗體或單克隆抗體的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，比如可以用相應(yīng)病毒免疫動(dòng)物，如鼠，從動(dòng)物血清中純化多克隆抗體，但是多克隆抗體相比單克隆抗體可能存在特異性不強(qiáng)的問題，有可能有假陽性結(jié)果的產(chǎn)生。具體到本發(fā)明，所述病毒抗體雖然可以采用多克隆抗體，但是單克隆抗體具有更明顯的優(yōu)勢(shì)，因此是本發(fā)明的優(yōu)選，制備所述單克隆抗體的方法比如可以是用相應(yīng)病毒免疫動(dòng)物，如鼠，取動(dòng)物脾臟B細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，從中獲取特異性較強(qiáng)的單克隆抗體。

作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，所述抗人IgG抗體為兔抗人IgG抗體或羊抗人IgG抗體，優(yōu)選為兔抗人IgG抗體。

作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，所述抗人IgM抗體為兔抗人IgM抗體或羊抗人IgM抗體，優(yōu)選為兔抗人IgM抗體。