[發(fā)明專利]一種通過測定IVF培養(yǎng)液中β-hCG濃度預(yù)測胚胎活力的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410227658.6
• 申請日: 2014-05-26
• 公開（公告）號: CN105203776A
• 公開（公告）日: 2015-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李潔;陳曉燕;莊廣倫;姜儻;張式鴻
• 申請（專利權(quán)）人: 李潔
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

所屬技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及輔助生殖醫(yī)學(xué)體外受精-胚胎移植(IVF-ET)領(lǐng)域，尤其是在非侵入性胚胎質(zhì)量評價(jià)及挑選部分。

背景技術(shù)

經(jīng)過三十余年的努力，輔助生殖技術(shù)(assistedreproductiontechnique，ART)已經(jīng)取得了多個(gè)重大突破，促排卵治療、體外受精和胚胎培養(yǎng)技術(shù)均獲得了較完善的發(fā)展。然而胚胎種植率還沒有得到足夠的改善。為獲得高妊娠率采用多個(gè)胚胎移植及其帶來的多胎妊娠率和妊娠期母嬰并發(fā)癥的高發(fā)現(xiàn)象依然普遍存在，嚴(yán)重影響了體外受精-胚胎移植治療(invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET)的有效率和安全性。因此，在IVF-ET中，如何有效地選擇最有活力的胚胎進(jìn)行移植從而在穩(wěn)定妊娠率的基礎(chǔ)上降低多胎率已成為當(dāng)今全世界范圍ART的熱點(diǎn)問題。

近年來隨著生物學(xué)標(biāo)記物檢測技術(shù)的快速發(fā)展，如何從胚胎發(fā)育過程中尋找其特定的生物標(biāo)記，從而客觀地評價(jià)胚胎發(fā)育和種植潛能已成為生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)應(yīng)用研究的重大挑戰(zhàn)。人絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin，hCG)是一種早期胚胎滋養(yǎng)球細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)層合體細(xì)胞分泌的，由α亞基及特異性β亞基以非共價(jià)鍵結(jié)合的糖蛋白激素。1984年FishelSBandEdwardsRG^[11首先采用放射免疫法測定發(fā)現(xiàn)人類囊胚培養(yǎng)液中存在微量可測定的β-hCG，其分泌量隨囊胚擴(kuò)張和孵出快速增加，但該方法測定耗時(shí)長且有放射污染。2011年Ramu等^[2]報(bào)道的酶聯(lián)免疫測定法靈敏度達(dá)到0.100mlU/ml，但需要大量標(biāo)本同時(shí)測定，且測定花費(fèi)時(shí)間約2天，不能滿足IVF臨床實(shí)驗(yàn)室篩選胚胎方法的要求。因此，如何開發(fā)客觀、精確、快速和簡單、方便、低成本的培養(yǎng)液中hCG檢測方法已成為當(dāng)前亟需解決的困難。

參考文獻(xiàn)：

1.FishelSB，EdwardsRG，EvansCJ.Humanchorionicgonadotropinsecretedbypreimplantationembryosculturedinvitro.Science.1984；223：816-8.

2.SivakumarRamu，Ph.D，BrianAcacio，M.D.,MarkAdamowicz,etal.Humanchorionicgonadotropinfromday2spentembryoculturemediaanditsrelationshiptoembryodevelopmentFertil&Steril.2011Sep；96(3)：615-617.

附圖說明

無

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有的胚胎體外培養(yǎng)液中β-hCG測定方法耗時(shí)長、樣本需成批非自動化操作、具有放射污染，不能滿足IVF臨床篩選胚胎技術(shù)的要求，本發(fā)明提供一種改良的電化學(xué)發(fā)光免疫法，該方法不僅靈敏度高(0.100mlU/ml)、特異性高(回歸系數(shù)＝0.989)、自動化測定、無污染、重復(fù)性及再現(xiàn)性好，而且每份標(biāo)本測定時(shí)間為20分鐘左右。經(jīng)過大樣本的回顧性分析證實(shí)胚胎培養(yǎng)液β-hCG水平與胚胎發(fā)育及種植潛能呈高度正相關(guān)，具備作為胚胎生物標(biāo)記物應(yīng)用于臨床開展選擇性胚胎移植的要求。本發(fā)明能幫助預(yù)測胚胎活力，前瞻性選擇具有種植潛力的胚胎移植、在穩(wěn)定妊娠率的基礎(chǔ)上減少移植胚胎數(shù)目降低多胎妊娠。

具體實(shí)施方式

在此申請專利的方法包括步驟：提供胚胎體外培養(yǎng)后剩余的培養(yǎng)液標(biāo)本；新鮮或凍存在-80℃中；采用改良電化學(xué)發(fā)光法測定所述培養(yǎng)液中β-人絨毛膜促性腺激素(β-hCG)水平；基于β-hCG水平預(yù)測胚胎發(fā)育和種植潛能；選擇分泌高水平β-hCG的胚胎進(jìn)行移植。

1.胚胎培養(yǎng)

①能夠使用本發(fā)明方法評估的人類胚胎可以通過任何現(xiàn)有已知技術(shù)的方法產(chǎn)生。

②在一些實(shí)施方案中，胚胎由卵母細(xì)胞常規(guī)體外受精(IVF)形成的受精卵發(fā)育而成。在IVF中，通常將卵母細(xì)胞置于精液(濃度為5000-10000條精子/卵細(xì)胞)中，使其發(fā)生體外受精。受精后16-18小時(shí)觀察原核情況，將正常受精(雙原核)的胚胎置于適用于卵裂期胚胎生長發(fā)育的培養(yǎng)液中。受精后第3天觀察胚胎情況，再將其轉(zhuǎn)移至適用于囊胚期胚胎生長發(fā)育的培養(yǎng)液中。可選擇第3天胚胎或囊胚移植到女性子宮腔內(nèi)。