[發明專利]一種細胞培養板及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201410226720.X
• 申請日: 2014-05-26
• 公開（公告）號: CN103966096A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 朱沛志;陳金帥;趙陽;李平
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12N5/0775;C08J7/12
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及一種細胞培養板及其制備方法和在細胞培養中的應用，屬于細胞培養技術領域。

背景技術

骨髓間充質干細胞是一群具有多種分化潛能的多能干細胞，能最終分化成骨、軟骨、肌肉、神經和脂肪等組織，具有以下特點：①來源較為廣泛，易于培養，能在宿主體內外長期存活，且具有自我更新和增殖能力；②低免疫源性，易于外源基因轉染和長期表達；③在適宜的環境中具有多項分化潛能等。近年來人們發現骨髓間充質干細胞還具有抑制同種異體免疫反應、減輕移植物抗宿主效應的作用，以上發現使得骨髓間充質干細胞在組織工程、器官移植及自身免疫性疾病領域有著廣泛的應用前景。但骨髓間充質干細胞在體外增殖較慢，因此，如何實現少量取樣批量體外培養增殖，是骨髓間充質干細胞應用研究的當務之急。

文獻Villa-Diaz等報道稱聚合物涂層PMEDSAH能夠支持人胚胎干細胞在多種不同的培養基中長期生長。這種成分確定的培養基質對于闡明人胚胎干細胞行為的內在機制和最優化人胚胎干細胞生物醫學應用條件有著重要意義(Luis G Villa-Diaz,Himabindu Nandivada,Jun Ding,et al.Synthetic polymer coatings for long-term growth of human embryonic stem cells.Nature biotechnology28(2010):581-583.)。Blin等采用不同交聯度的聚賴氨酸/透明質酸納米膜來調控鼠胚胎干細胞的納米環境。結果發現，胚胎干細胞在天然膜上的粘附程度最低，能夠較好地保持多功能性，隨著交聯度的增加，粘附程度增加(Guillaume Blin,Nassrine Lablack,Marianne Louis-Tisserand,et al.Nano-scale control of cellular environment to drive embryonic stem cells selfrenewal and fate.Biomaterials31(2010):1742–1750.)。Hernandez等為了簡化人干細胞培養條件，采用CELLstart基質和成分確定的培養基在無飼養層的條件下實現了人胚胎干細胞的自我復制。實驗中采用的兩種人胚胎干細胞都能夠在該條件下傳代20多次，并且保持多功能性(Diana Hernandez,Ludmila Ruban,and Christopher Mason.Feeder-free culture of human embryonic stem cells for scalable expansion in a reproducible manner.Stem Cells and Development20(2011):1089-1099.)。Markert等設計了生物表面結構陣列(BSSA)用于培養鼠胚胎干細胞，該陣列包括504種不同的表面微結構。結果發現，存在一種特定的表面微結構使得干細胞能在無飼養層的條件下增殖(Lotte D’Andrea Markert,Jette Lovmand,Morten Foss,et al.Identification of distinct topographical surface microstructures favoring either undifferentiated expansion or differentiation of murine embryonic stem cells.Stem Cells and Development18(2009):1331-1343.)。這些現有技術存在制備成本高，特別是使用動物中提取的細胞外基質可能含有一些致病物質會損害細胞的生長和分化，因而無法大規模生產。

羧基丁腈膠乳(XNBRL)是作為是丁二烯、丙烯腈和丙烯酸或甲基丙烯酸的三元共聚物。與未引入羧基的丁腈膠乳相比，XNBRL具有突出的機械穩定性和凍解穩定性，其黏合性和與其他高分子的相容性也得到較大改善，它可以用金屬氧化物進行硫化，所得膠乳薄膜的機械強度和耐油性均優于非羧化的丁腈膠乳。據大量文獻表示羧基丁腈膠乳具備天然膠乳的一些性能，羧基丁腈膠乳由丁二烯和甲基丙烯酸乳液共聚制得的橡膠膠乳，在分子主鏈上含有親水的強粘性集團羧基，可避免生霉，蟲蛀，產品質量高且穩定，有較好的柔順性、耐油性、耐化學性、耐刺穿性和耐磨性能，低可提物以及耐靜電性能，粘接性能較好且價格便宜。