[發明專利]一種熒光檢測三價鐵離子的方法

有效

• 申請號: 201410223124.6
• 申請日: 2014-05-23
• 公開（公告）號: CN103983765A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 鈔建賓;劉瑜紅;張永斌;張艷
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

技術領域

本發明涉及三價鐵離子的檢測技術，具體屬于一種以7-二乙氨基香豆素-4-甲醛為熒光試劑，快速、定量熒光檢測三價鐵離子的方法。

背景技術

鐵元素是一種非常重要的微量元素，具有重要的生物學意義。例如鐵元素是大腦中最豐富的過渡金屬元素，大腦組織利用他作為酶的重要組成成分參與氧氣的傳遞和代謝；鐵元素也是許多金屬蛋白不可缺少的組分；鐵元素還是許多酶的催化劑參與有氧代謝和電子轉移等等。另外，人體內的鐵元素是構成血紅蛋白，肌紅蛋白的原料，而且還是維持人體正常生命活動最重要的一些酶的組分，與能量代謝關系密切。同時，鐵離子的轉運，儲存以及平衡都與有機體緊密相關，鐵離子的缺乏和過量都會導致各種各樣的機體功能紊亂。因此，準確檢測鐵離子對有效診斷某些疾病顯得非常重要。在目前已知的檢測鐵離子的方法中，由于熒光分析法有快速響應和高靈敏度的特點，熒光探針被廣泛研究。

近幾年來，人們開始關注設計合成對Fe³⁺具有特異性響應的熒光探針，并合成了幾類有機熒光探針，具有代表性的主要有：香豆素類，羅丹明類，熒光素類,熒光染料BODIPY，萘腙衍生物，本探針化合物與Fe³⁺作用后，熒光強度顯著降低，其他一些常見金屬陽離子幾乎沒有顯著地熒光響應。因此本發明可以作為選擇性檢測生物體內Fe³⁺的熒光探針，也可用于熒光標記細胞內Fe³⁺，為臨床醫學中相關疾病的診斷提供幫助。

發明內容

本發明的目的在于提供一種定量檢測三價鐵離子的熒光檢測方法，該方法靈敏度高、選擇性好、廉價、方便。

本發明根據文獻合成香豆素衍生物7-二乙氨基香豆素-4-甲醛，并將此作為熒光試劑用于Fe³⁺的檢測。7-二乙氨基香豆素-4-甲醛的結構式及合成方法如下如下：

結構式：

合成步驟：

(1)在二甲苯溶液中，加入SeO₂和7-二乙氨基-4-甲基香豆素(2.06g，8.9mmol)。開動攪拌，反應混合物加熱回流反應3h。

(2)待棕色混合物冷卻至室溫，再加入另一份SeO₂,該體系繼續回流反應3h。用丙酮溶解深棕色殘油，過濾掉固體。

(3)在己烷:丙酮(4:1)溶液體系中通過柱色譜法濃縮凈化得到深黃色固體。分離純化得620mg7-二乙氨基香豆素-4-甲醛，收率為28％。

本發明提供的一種定量檢測三價鐵離子的熒光檢測方法，步驟為：

(1)配制pH＝7.0濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，并用乙腈配制1mM的7-二乙氨基香豆素-4-甲醛探針儲備液；

(2)按體積比1000:1將HEPES緩沖溶液和7-二乙氨基香豆素-4-甲醛探針儲備液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，494nm處的熒光強度逐漸減弱；

(3)用蒸餾水配制10mM的Fe³⁺溶液，把2000μL的HEPES緩沖溶液和2μL7-二乙氨基香豆素-4-甲醛探針儲備液加到熒光比色皿中，每隔10s加入1μL?Fe³⁺進行熒光滴定實驗，共加18μL，以Fe³⁺濃度為橫坐標，以相對熒光強度F₀-F為縱坐標繪制圖，得到Fe³⁺濃度的工作曲線，線性回歸方程為：△F＝0.7597c+1.8785，c的單位為10^-6mol/L。

(4)將HEPES緩沖溶液2000μL和7-二乙氨基香豆素-4-甲醛探針儲備液2μL加到干凈的熒光比色皿中，用移液槍吸取VμL待測樣品溶液，加入到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度計上檢測，將測得的熒光強度代入步驟(3)的線性回歸方程，得到濃度c＝2000μL×c×10^-6/VμL，即可求得Fe³⁺的濃度。

經實驗驗證，其它金屬陽離子不干擾體系對Fe³⁺的測定。所以，香豆素衍生物7-二乙氨基香豆素-4-甲醛可作為熒光試劑在檢測三價鐵離子中的應用。

與現有技術相比，本發明作為選擇性檢測生物體內Fe³⁺的熒光探針有如下優點：探針化合物與Fe³⁺作用后，熒光強度顯著降低，其他一些常見金屬陽離子幾乎沒有熒光響應。

附圖說明：