[發明專利]一種多肽序列及其應用

在審

• 申請號: 201410222380.3
• 申請日: 2014-05-23
• 公開（公告）號: CN105085615A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 康向東;吳蓉;許健;孔倩倩;相芬芬
• 申請（專利權）人: 上海市普陀區中心醫院;上海中醫藥大學附屬普陀醫院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/533
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

技術領域

本發明涉及一種多肽序列，尤其涉及一種用于檢測巨細胞病毒的多肽序列、以及所述多肽序列的應用。

背景技術

人巨細胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)屬于孢疹病毒科，是人類皰疹病毒組中最大的一種病毒，可引起人類巨細胞病毒感染。HCMV在人群中普遍易感，成人對HCMV的感染率高達90％以上，通常無明顯癥狀，潛伏在宿主細胞中，為隱性感染，而在免疫功能低下或缺陷時，如妊娠、多次輸血、移植受者(HCMV病毒感染也是器官移植失敗的主要原因之一)、艾滋病患者等，常呈激發感染(顯性感染)，病毒可侵襲多個器官和系統，引起嚴重疾病，嚴重者可致死亡。因此，早期監測HCMV潛伏、激活感染狀態，對于免疫功能低下患者至關重要。

然而由于HCMV病毒在人體內感染的普遍存在，通常潛伏在宿主細胞中不引起明顯癥狀，給HCMV激活感染的診斷帶來很大困難。目前HCMV感染診斷方法主要有：

1)、分離培養

用臨床標本進行體外分離培養，是目前診斷HCMV感染最可靠的方法，被認為是檢測HCMV感染狀態的金標準。該方法將檢測標本(血液、尿液、唾液、腹水、臍血、腦脊液、氣管灌洗液等)接種于成纖維細胞，出現細胞病變即為陽性。但是由于HCMV病毒體外增殖緩慢，初次分離至少需一個月才能使檢測細胞出現病變，實驗周期長、易污染，且無法與其他病毒感染區分、對于經藥物治療后的標本病毒分離常為陰性結果，因而臨床應用受限，現主要應用于科研。

2)血清檢測抗原、抗體

目前主要應用的是pp65抗原血癥檢測法，當HCMV激活感染時，PP65抗原于6～24小時內表達于外周血淋巴細胞、單核細胞、多形核白細胞和血管內皮細胞中，是HCMV活動性感染的早期診斷診斷標志物，但是由于存在假陽性、假陰性結果，該方法目前還存在爭議。

3)血清學檢測抗體

特異性抗體檢測主要是檢測HCMV感染后刺激機體產生的抗巨細胞病毒IgM和IgG抗體。抗HCMVIgG抗體多份血清檢測可用于HCMV臨床診斷，血清IgG抗體陽性轉化表明是原發感染，而連續監測IgG滴度急劇升高表明存在HCMV活動性感染，但是HCMV成人感染率極高，IgG大多數人為陽性，檢測意義不大；血清抗HCMV特異性IgM抗體檢測，因其抗體存在時間短，診出陽性率較低，另外Bendiksen等人研究發現，IgM水平與病毒復制無關，因此IgM也不能潛伏、激發感染診斷的良好指標。

4)核酸雜交、原位雜交檢測

目前對于HCMV的測序已經完成，大大促進了核酸雜交技術在HCMV診斷中的應用。采用該方法能直接在感染組織中發現包涵體，較傳統的免疫組織化學方法更為靈敏、特異。但是由于方法學上的特殊性，完成全過程受諸多因素的影響，包括：標本處理時間，固定劑的選擇，單克隆抗體細胞株的特異性等，另外該方法對鏡檢人員技術要求較高，方法上難以實現高通量檢測，抗污染能力不強，成本過高，目前難以普及。

5)PCR方法

PCR方法檢測HCMV，靈敏度為0.15fg，敏感度和特異度較高，可以實現對病毒檢測的量化，在檢測病毒活動性、評價抗病毒療效等方面具有重要的意義。

從目前PCR檢測結果來看，單用一對PCR引物可引起假陰性，主要原因可能是臨床標本中HCMV病毒株的不同、或者病毒基因組中極小變異、以及病毒拷貝數太低所致。此外，引物設計序列針對HCMV同一基因的不同部位，PCR結果也有明顯差異，方法還需標準化，目前市場上還沒有商品化的HCMV的PCR診斷試劑盒。

發明內容

本發明設計合成了一種多肽序列，可用于測定病人外周血中具有保護性CMV特異CD8+T細胞數量的臨床界限，監測評估機體內感染的CMV再激活及致病的可能。

應當理解的是，本發明下文中，多肽或多肽序列與氨基酸序列具有相同的含義。

本發明的第一個方面提供了一種多肽序列，所述多肽序列包括SEQIDNo.1所示序列。

SEQIDNo.1：SerThrHisProMetValThrArgSerLys。

下文中，SEQIDNo.1也可以簡寫為：STHPMVTRSK。

本發明上述內容中，所述多肽序列優選為SEQIDNo.1所示序列、及其多聚體中的任意一種或幾種。

其中，所述多聚體優選地可以是二聚體、三聚體、四聚體或更多聚體。

本發明第二個方面是提供一種多肽序列在制備檢測巨細胞病毒試劑中的應用，所述多肽序列包括SEQIDNo.1所示序列。