[發明專利]一種利用微生物發酵將劍麻皂苷轉化成皂苷元的方法

有效

• 申請號: 201410221277.7
• 申請日: 2014-05-25
• 公開（公告）號: CN103966300A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 郝再彬;孫昊;王彥超;周菲菲;李霞;王秀麗
• 申請（專利權）人: 桂林理工大學
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1. 一種利用微生物發酵將劍麻皂苷轉化成皂苷元的方法，其特征在于具體步驟為：

(1)制備培養基：

a.稱取去皮土豆200~250g，并將土豆切成1.8~2.2cm的方塊，加0.5~1.5L水后加熱煮沸25~35min，之后冷卻至室溫，用三層紗布過濾，定容濾液至0.5~1.5L，備用；

b.取0.1L步驟(1)第a制得的備用濾液置于250ml的三角瓶中，標記為1號備用，用于目的菌株的固體平面培養；取0.2L步驟(1)第a制得的備用濾液置于1L的三角瓶中，標記為2號備用，用于目的菌株的液體擴增培養；

(2)目的菌株的固體平面培養：

向步驟(1)第b步中標記為1號備用的三角瓶中加入1.5g瓊脂粉，用牛皮紙包扎瓶口，在1.103MPa、121℃下滅菌20min，取出后迅速地倒入直徑為9cm的培養皿內，加蓋，待瓊脂凝固后備用，即為固體培養基；在無菌條件下，將斜面保存的目的菌株涂布在固體培養基上，30℃下培養72小時，即完成目的菌株的固體平面培養；

(3)目的菌株的液體擴增培養：

將步驟(1)第b步中標記為2號備用的三角瓶在1.103MPa、121℃下滅菌20min，冷卻后降至室溫，然后向其中加入步驟(2)中完成目的菌株固體平面培養的菌落小餅10個，在30℃以200轉/分鐘的速度搖床振蕩培養72小時，即完成目的菌株的液體擴增培養；所述菌落小餅的直徑為1cm；

(4)目的菌株對底物發酵制得皂苷元：

稱取劍麻抽絲后的干殘渣200g，加入1L自來水，煮沸提取60min后三層紗布過濾，濾液定容至1L，在1.103MPa，121℃下滅菌20min，轉入2L玻璃瓶中，在無菌條件下，接入0.1L步驟(3)中完成目的菌株液體擴增培養的的菌液，30℃下以200轉/分鐘的速度搖床振蕩發酵72小時，即制得含有皂苷元的產物；

所述目的菌株為有選擇性地從土壤樣品中篩選的目的菌株，該目的菌株在以劍麻殘渣提取液為發酵液的發酵過程中能夠降解劍麻皂苷糖基，同時制備出皂苷元，該目的菌株現保藏于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏日期：2013年7月9日，保藏編號：CCTCCM2013322，分類命名：GLHZB22。