[發(fā)明專利]DSE菌株24L-4及其在鐵皮石斛生產(chǎn)上的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410220965.1
• 申請日: 2014-05-23
• 公開（公告）號: CN103981102A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝玲;覃麗萍;張雯龍;秦碧霞;藍(lán)桃菊
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P21/00;A01G31/00;A01H4/00;C12R1/645
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44248
• 代理人: 胡吉科

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及能促進(jìn)鐵皮石斛生長的DSE菌株24L-4及其在鐵皮石斛生產(chǎn)上的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

深色有隔內(nèi)生真菌(Dark?septate?endophyte，DSE)是植物共生真菌的典型代表之一，其一般特征是菌絲顏色較深、具有明顯橫隔，廣泛存在于健康植物根的表皮、表層甚至維管束組織的細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間隙，能夠在植物細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞間隙形成“微菌核”等結(jié)構(gòu)特征。劉茂軍等(深色有隔內(nèi)生真菌(DSE)研究進(jìn)展[J].菌物學(xué)報，2009，28(6)：888-894)研究報道DSE具有促進(jìn)宿主礦質(zhì)營養(yǎng)吸收、促進(jìn)宿主對有機(jī)養(yǎng)分的吸收、提高宿主抗逆性、提高宿主的抗病能力等生態(tài)學(xué)功能，可望促進(jìn)作物生長和提高抗逆能力，減少化學(xué)農(nóng)藥肥料的使用，修復(fù)和降低環(huán)境污染。?

鐵皮石斛是一種珍稀名貴的藥用和觀賞植物，由于鐵皮石斛的生長除了對氣候和上壤環(huán)境要求較高外，在自然界中其生長還需要共生真菌的參與，人工栽培往往成活率較低，生長緩慢。通過篩選能顯著促進(jìn)鐵皮石斛生長的DSE真菌，建立“鐵皮石斛-DSE”高效共生體系，提高鐵皮石斛的成活率和產(chǎn)量，可用于鐵皮石斛專用菌肥的開發(fā)利用。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種DSE菌株24L-4及其在鐵皮石斛生產(chǎn)上的應(yīng)用，能促進(jìn)鐵皮石斛的生長。?

本發(fā)明所述的DSE菌株24L-4為Devriesia?sp.，該菌株已于2014年4月28日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，其地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，其保藏編號為：CGMCC?No.9098。?

該菌株從茶花葉部組織分離獲得，通過觀察其在宿主植物的定殖特征確定其為DSE菌株，菌株命名為24L-4。經(jīng)菌株形態(tài)學(xué)和18S?rDNA序列分析，該菌株鑒定為德弗霉菌屬Devriesia?sp.真菌。?

所述DSE真菌菌株24L-4的提純步驟包括：?

步驟A：取茶花葉片，清洗殺菌后吸干表面水分后置于玉米粉培養(yǎng)基培養(yǎng)至菌落長出；?

步驟B：將葉部組織置于培養(yǎng)皿平板上，于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直至葉片組織周圍長出菌絲體，挑取菌絲置于CMMY培養(yǎng)基，得到純化菌株。?

優(yōu)選的，所述玉米粉培養(yǎng)基包括：玉米粉6-10g/L，瓊脂粉7-8g/L。?

優(yōu)選的，CMMY培養(yǎng)基包括：麥芽提取物8-12g/L，酵母浸膏1.5-3g/L，玉米粉瓊脂7-9g/L，瓊脂7-9g/L。?

所述DSE真菌菌株在促進(jìn)鐵皮石斛組培苗生長上的應(yīng)用，包括以下步驟：?

步驟A′：將供試菌株活化后接種于燕麥培養(yǎng)基中，待菌落長大后備用；?

步驟B′：選擇長勢一致的無菌鐵皮石斛組培苗移栽至培養(yǎng)皿平板的菌落上，將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)束后將根部培養(yǎng)基洗凈后干燥后稱量干重。?

優(yōu)選的，所述步驟B′中，培養(yǎng)的條件為：溫度為25℃，光照強(qiáng)度為160-200μmolm^-2s^-2，光照時間為15-18h，培養(yǎng)時間為40-50d。?

優(yōu)選的，所述燕麥培養(yǎng)基包括：燕麥粉10g/L，瓊脂18g/L，MgSO₄·7H₂O1g/L，KH₂PO₄1.5g/L，NaNO₃1g/L。?

所述DSE菌株在促進(jìn)鐵皮石斛盆栽苗生長上的應(yīng)用，包括以下步驟：?

步驟A″：選取長勢一致的鐵皮石斛苗，移栽至培養(yǎng)杯中，移栽成活后待用；?

步驟B″：在馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基PDB中接入菌絲塊，振蕩培養(yǎng)結(jié)束后將培養(yǎng)物打碎配置成菌液，灌根鐵皮石斛苗。?

優(yōu)選的，所述步驟A″中，所述培養(yǎng)基質(zhì)為水草。?

優(yōu)選的，所述步驟B″中馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基包括：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000mL。?

優(yōu)選的，所述步驟B″中灌根條件為每杯鐵皮石斛灌根25-35mL菌液，每隔10-15d灌根一次，共灌根2-3次。?

本發(fā)明的有益效果是：該菌株可應(yīng)用于鐵皮石斛專用微生物菌劑和生物有機(jī)肥的開發(fā)，對促進(jìn)鐵皮石斛的規(guī)模化生產(chǎn)和保護(hù)生態(tài)環(huán)境具有重要意義，具有廣闊的應(yīng)用前景。?

附圖說明

圖1是本發(fā)明中菌株24L-4的菌落形態(tài)。?

圖2是本發(fā)明中鐵皮石斛組培苗接種菌株24L-4培育90天后長勢對照。?

圖3是本發(fā)明中在鐵皮石斛根部觀察到菌株24L-4的DSE微菌核定殖特征。?