[發(fā)明專利]一種DSE菌株及其在甘蔗生產(chǎn)上的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410220964.7
• 申請(qǐng)日: 2014-05-23
• 公開（公告）號(hào): CN103981101A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝玲;覃麗萍;張?chǎng)?/a>;秦碧霞;藍(lán)桃菊;譚芳;李松;劉欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;A01P21/00;C12R1/645
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44248
• 代理人: 胡吉科

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及能促進(jìn)作物生長(zhǎng)的一種DSE菌株24L-4及其在甘蔗生產(chǎn)上的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

近年來由于大量施用化肥對(duì)糧食安全、生態(tài)環(huán)境和資源利用產(chǎn)生的危害已經(jīng)引起全世界的廣泛重視。減少化肥施用和提高化肥的利用率是當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中需解決的重要問題。目前，利用自然界中植物共生微生物促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng),正在成為農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)、可持續(xù)性發(fā)展的一個(gè)重要方向。?

一直以來我國(guó)甘蔗成本高，缺乏國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力。在甘蔗種植的農(nóng)資投入中，化肥所占的比重最大，對(duì)甘蔗產(chǎn)量的影響也最為顯著。此外，我國(guó)甘蔗主產(chǎn)區(qū)蔗地90％以上為旱坡地，土壤保水保肥能力差，化肥利用率低。因此，充分發(fā)揮自然生態(tài)系統(tǒng)中的共生微生物的促生潛力，提高我國(guó)甘蔗的生產(chǎn)能力，保護(hù)和改善蔗地的生態(tài)環(huán)境，對(duì)促進(jìn)我國(guó)甘蔗產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)性發(fā)展具有重要意義。目前，已有學(xué)者開展了關(guān)于固氮菌、叢枝菌根能促進(jìn)甘蔗生長(zhǎng)的報(bào)道。?

深色有隔內(nèi)生真菌(Dark?septate?endophyte，DSE)是植物共生真菌的典型代表之一，劉茂軍等(深色有隔內(nèi)生真菌(DSE)研究進(jìn)展[J].菌物學(xué)報(bào)，2009,28(6):888-894)及Jumpponen?A?and?Trappe(Dark-septate?root?endophytes:a?review?with?special?reference?to?facultative?biotrophic?symbiosis[J].New?Phytol，1998.140:295-310)研究表示，它們能夠定居在植物根部但對(duì)宿主無致病性，菌絲深色有分隔，能夠在根部形成“微菌核”等結(jié)構(gòu)特征。Mandyam?and?Jumpponen?A(2005.Seeking?the?elusive?function?of?the?root-colonising?dark?septate?endophytic?fungi[J].Studies?in?Mycology，53:173-189.)、張玉潔(2010.植物深色有隔內(nèi)生真菌(DSE)的研究進(jìn)展[J].文山學(xué)院學(xué)報(bào)，23(1):145-150.)、劉茂軍等研究表明DSE與宿主互惠共生，賦予植物優(yōu)良生長(zhǎng)性狀，能提高宿主抗病蟲能力及在脅迫環(huán)境中的抗逆性，還能促進(jìn)玉米(張杰，2010.云南兩個(gè)重金屬礦區(qū)(暮乃、個(gè)舊)深色有隔內(nèi)生真菌(DSE)的研究[D])等作物生長(zhǎng)。因此，通過篩選獲得能促進(jìn)甘蔗生長(zhǎng)的DSE菌株，建立“甘蔗-DSE”高效共生體系，可用于微生物菌肥的開發(fā)，對(duì)于甘蔗種植是具有廣闊前景的。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種DSE菌株及其在甘蔗生產(chǎn)上的應(yīng)用。?

本發(fā)明所述的DSE菌株為Devriesia?sp.，該菌株已于2014年4月28日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，簡(jiǎn)稱CGMCC，其地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，其保藏編號(hào)為：CGMCC?No.9098。?

該菌株從茶花葉部組織分離獲得，通過觀察其在宿主植物的定殖特征確定其為DSE菌株，菌株命名為24L-4。經(jīng)菌株形態(tài)學(xué)和18S?rDNA序列分析，該菌株鑒定為德弗霉菌屬Devriesiasp.真菌。?

其中，所述DSE菌株24L-4的分離方法包括以下步驟：?

步驟A：取茶花葉片，清洗和表面消毒后吸干表面水分后置于玉米粉培養(yǎng)基培養(yǎng)至菌落長(zhǎng)出；?

步驟B：將葉片組織置于平板上，于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直至葉片組織周圍長(zhǎng)出菌絲體，挑取菌絲尖端置于CMMY培養(yǎng)基，得到純化菌株。?

優(yōu)選的，所述步驟A中玉米粉培養(yǎng)基包括：玉米粉6-10g/L，瓊脂粉7-8g/L。?

優(yōu)選的，所述步驟B中CMMY培養(yǎng)基包括：麥芽提取物8-12g/L,酵母浸膏1.5-3g/L,玉米粉瓊脂7-9g/L，瓊脂7-9g/L。?

所述DSE菌株在甘蔗組培苗生長(zhǎng)上的應(yīng)用，包括以下步驟：?

步驟A′：將供試菌株活化后接種于燕麥培養(yǎng)基中，待菌落長(zhǎng)大后備用；?

步驟B′：選擇長(zhǎng)勢(shì)一致的無菌甘蔗組培苗移栽至培養(yǎng)皿平板的菌落上，置于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，將根部培養(yǎng)基洗凈后干燥后稱量干重。?

優(yōu)選的，所述步驟A′中，燕麥培養(yǎng)基包括：燕麥粉8-12g/L，瓊脂15-18g/L，MgSO₄·7H₂O1-2g/L，KH₂PO₄1-2g/L，NaNO₃1-2g/L。?