[發明專利]作為抗結核病藥的吡啶并嘧啶化合物

在審

• 申請號: 201410219962.6
• 申請日: 2009-06-17
• 公開（公告）號: CN103983627A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: P·布羅丹;T·克里斯托夫;盧載成;金在昇;A·熱諾韋西奧;D·P·C·費尼斯坦;全希暻;F·A·埃旺;姜善姬;李世淵;徐旼廷;樸垠錚;M·孔特雷拉斯多明格斯;南芝娟;金恩惠
• 申請（專利權）人: 韓國巴斯德研究所;國家健康與醫學研究院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C07D271/113;A61P31/06;C07D471/04
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 傅宇昌

1.篩選方法，其包括下列步驟：

(a)用經熒光標記的結核分枝桿菌分批感染宿主細胞；

(b)除去游離的未結合的分枝桿菌；

(c)將待測試的化合物添加到多孔板上；

(d)將感染了經熒光標記的結核分枝桿菌的所述宿主細胞接種入包含所述化合物的所述多孔板；

(e)溫育包含感染了經熒光標記的結核分枝桿菌的宿主細胞和所述化合物的所述多孔板；

(f)熒光標記所述宿主細胞；

(g)使用自動化共焦顯微鏡檢查分析所述多孔板。

2.權利要求1的方法，其中所述篩選方法尋找干擾在所述宿主細胞內結核分枝桿菌繁殖的化合物。

3.權利要求1或2的方法，其中所述宿主細胞為巨噬細胞，優選地活巨噬細胞。

4.權利要求1至3中任一項的方法，其中所述自動化共焦熒光顯微鏡檢查測量胞內分枝桿菌生長。

5.權利要求1至4中任一項的方法，其中步驟(g)包括，對于每一種化合物，測量：

-總宿主細胞數目，例如總巨噬細胞數目；

-被感染的宿主細胞的百分比；和/或

-感染抑制百分比。

6.權利要求5的方法，其中：

(i)低的(總)細胞數目表明了所述化合物的毒性和/或在巨噬細胞內結核分枝桿菌的不受限制的生長；

(ii)高的(總)細胞數目表明了所述化合物是非毒性的并且阻止分枝桿菌生長。

7.前述權利要求中任一項的方法，其包括使用選自下列中的至少一個的對照：

-替代步驟(c)中的化合物，添加具有已知的抗結核病活性的化合物(作為陽性對照)，例如異煙肼、利福平、乙硫異煙胺或莫西沙星；

-替代步驟(c)中的化合物，添加DMSO或抗生素對照(作為陰性對照)。

8.前述權利要求中任一項的方法，其中所述結核分枝桿菌用GFP進行標記。

9.前述權利要求中任一項的方法，其中所述宿主細胞用SYTO60進行標記。

10.前述權利要求中任一項的方法，其中在步驟(b)之后，用抗生素，優選地阿米卡星進行溫育。

11.前述權利要求中任一項的方法，其用于大規?；瘜W品庫的高流通量篩選(HTS)。

12.在權利要求1至11中任一項的方法之中鑒定出的化合物，其干擾在宿主細胞內，優選地在宿主巨噬細胞內結核分枝桿菌的繁殖。

13.權利要求12的化合物，其由下式所示：