[發明專利]一種microRNA在豬肌內脂肪檢測中的應用

無效

• 申請號: 201410218807.2
• 申請日: 2014-05-21
• 公開（公告）號: CN103981267A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 曹建華;劉慧瑩;趙書紅;李長春;李新云;朱猛進;余梅
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一種與豬肌內脂肪含量相關microRNA標志物在豬肌內脂肪相關檢測中的應用，其特征在于該標志物的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：9所示。

2.一種權利要求1所述的與豬肌內脂肪含量相關microRNA標志物的特異引物在檢測與豬肌內脂肪含量相關差異microRNAs中的應用，其特征在于，所述的特異引物是如下所示的引物對和莖環引物，其核苷酸序列如下所示：

U6基因的引物：

正向引物：TCGCTTCGGCAGCACATATAC，

反向引物：CGAATTTGCGTGTCATCCTTGC；

18S?rRNA基因的引物：

正向引物：CGACCATAAACGATGCCGACT，

反向引物：GTGCCCTTCCGTCAATTCCT；

ssc-miR133a3p基因的引物：

莖環引物：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCAGCTG，

正向引物：CGCGGATTGGTCCCCTTC，

通用引物：CCAGTGCAGGGTCCGAGGTA。

3.如權利要求2所述的與豬肌內脂肪含量相關microRNA標志物的特異引物在檢測與豬肌內脂肪含量相關差異microRNAs中的應用，其特征在于，U6基因的引物、18S?rRNA基因的引物以及ssc-miR133a3p基因的引物單獨或組合作為檢測豬肌內脂肪含量的標準化的內參標志物，其中：所述的U6基因的引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2和SEQ?ID?NO：3所示，所述18S?rRNA基因的引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：5所述，ssc-mi?R133a3p基因的引物如SEQ?ID?NO：6和SEQ?ID?NO：7所述，這些引物單獨或組合使用作為檢測肌內脂肪含量的標準化的內參標志物。

4.如權利要求2所述的與豬肌內脂肪含量相關microRNA標志物的特異引物在檢測與豬肌內脂肪含量相關差異microRNAs中的應用，其特征在于，采用雙內標的法構建反轉錄反應體系，該反轉錄反應體系包括如下所述：

核苷酸序列如SEQ?ID?NO：9所示的microRNAs標志物和如SEQ?ID?NO：2和SEQ?ID?NO：3所示的引物，該反轉錄反應體系如下所示：

總RNA/mRNA?20ng-5μg/5-500ng；

0.5μg/μl的Anchored?Oligo(dT)₁₈引物，1μl；

0.1μg/μl的隨機引物，1μl；

或0.5μl的GSP特異性引物，2pmol；

2×反轉錄反應Mix，10μl，RT/RI?Enzyme?Mix反轉錄酶，1μl；去基因組DNA酶，1μl；

RNase-無RNA酶水，補充至20μl。