[發(fā)明專利]一種復合生防菌劑及其制備方法和應用

有效

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• 申請日: 2014-05-22
• 公開（公告）號: CN103952366A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設計）人: 段占娥
• 申請（專利權）人: 段占娥
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01P3/00;C05F11/08;C05F3/00;C12R1/085;C12R1/38
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技術領域

????本發(fā)明屬于微生物防治技術領域，具體而言，涉及一種防治農(nóng)作物土傳病害的復合生防菌劑及其制備方法和應用。

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背景技術

農(nóng)作物土傳病害每年給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失，因此病害防治工作成為當前農(nóng)業(yè)科學的當務之急。目前，農(nóng)作物土傳病害的防治方法主要是以利用抗病品系植株以及化學防治為主。一方面，使用抗病品系的植株可以達到經(jīng)濟有效的防治效果，但要想獲得一株理想的抗病品系并不是一件容易的事，而且抗病品種往往在其推廣幾年之后便出現(xiàn)抗性喪失甚至生長不良等情況；另一方面，化學防治由于其防效較高、速度快、抗菌譜較廣等優(yōu)點而在農(nóng)作物土傳病害防治中起到非常重要的作用，然而它又受到三個因素的限制：一是目前高效低毒的化學殺菌藥劑品種較少，大多數(shù)仍為毒性較大的藥劑，以毒殺菌并不是長久之計；二是環(huán)境因素對防治效果的影響也不小，當環(huán)境條件適合病原菌侵入和傳播時，其防治效果往往不能令人滿意；三是化學藥劑容易造成環(huán)境污染，危機人類日常生活。作為病害防治方法之一的生物防治，在某些條件下具有良好的防治效果，并己成為目前病害防治研究和開發(fā)的熱點。

近年來，國內(nèi)外廣泛利用有益微生物及其代謝產(chǎn)物來抑制病原菌的生存活動，使這一防治策略得以迅速發(fā)展，拮抗菌在農(nóng)作物土傳病害生物防治這一領域起到了非常重要的作用，包括細菌、放線菌、酵母菌甚至霉菌，而人們在應用中仍主要以拮抗細菌為主。具有拮抗能力的細菌無論是在自然發(fā)生的生物防治現(xiàn)象中還是人為應用于病害防治的試驗中，都具有非常明顯的防治功效，其主要優(yōu)勢在于:(l)細菌的種類和數(shù)量繁多，在植物的根際和土壤表面及內(nèi)層都大量存在；(2)拮抗細菌對病原菌的抑制作用方式較多，包括競爭營養(yǎng)、寄生、分泌殺菌物質(zhì)、誘導植物產(chǎn)生抗性等方式，從而對病原菌產(chǎn)生不利影響；(3)具有驚人的繁殖速度，一般細菌的生長繁殖速度要快于真菌、放線菌等；(4)細菌可以人工培養(yǎng)，便于控制，在實踐中易于操作；(5)某些細菌不僅能防治病害，還具有促進植株生長等功效，從而增加產(chǎn)量。

灰霉菌屬半知菌亞門葡萄孢屬。灰霉菌分生孢子梗細長，灰黑色，大小為(960～1200)μm×(16～22)μm，不規(guī)則樹狀分支，分支頂端細胞膨大成球形，其上著生許多小梗，小梗上著生分生孢子，形似葡萄穗狀。分生孢子單胞無色，橢圓形或卵圓形，大小為(8～14)μm×(6～9)μm，孢子集生呈灰色。菌核褐色，形狀不規(guī)則，大小為(2～4)mm×(1～3)mm[1]。灰霉菌能夠侵染200多種植物，屬真菌病害，多種植物的花、果、葉、莖均可發(fā)病。該菌核在土壤或病殘體上越冬越夏，病菌耐低溫，在7-20℃大量產(chǎn)生孢子，苗期棚內(nèi)溫度15-23℃。弱光，相對濕度在90％以上或幼苗表面有水膜時易發(fā)病。花期最易感病，借氣流，灌溉及農(nóng)事操作從傷口、衰老器官侵入。目前國內(nèi)對灰霉病防治的農(nóng)藥主要為化學產(chǎn)品，主要有：乙霉威、腐霉利、異菌脲、菌核凈、嘧霉胺、井岡霉素等。鑒于化學藥劑存在環(huán)境污染問題，因此研究適宜的防治灰霉病的新型生防菌劑，這對于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的長遠發(fā)展顯得尤為重要。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的在于提供一種防治農(nóng)作物土傳病害的復合生防菌劑，該菌劑對灰霉菌有良好抑制效果，可防治蔬菜灰霉菌病，提高蔬菜產(chǎn)量。另外，本發(fā)明的另一個目的在于提供一種上述復合生防菌劑的制備方法和應用。

本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的：

一種復合生防菌劑，該菌劑由蠟狀芽孢桿菌和綠針假單胞菌按照1:5-20的菌落形成單位數(shù)目比配制而成。優(yōu)選地，該菌劑由蠟狀芽孢桿菌和綠針假單胞菌按照1:10的菌落形成單位數(shù)目比配制而成。

本發(fā)明提供的上述復合生防菌劑，其中所述的蠟狀芽孢桿菌為蠟狀芽孢桿菌（Bacillus?cereus）CICC21687；所述的綠針假單胞菌為綠針假單胞菌（Pseudomonas?chlororaphis）CICC20676。

一種上述復合生防菌劑的制備方法，該方法包括如下步驟：

（1）將蠟狀芽孢桿菌、綠針假單胞菌分別接種到培養(yǎng)液中進行液態(tài)種子培養(yǎng)及液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到活菌數(shù)大于1.0×10⁹個/ml的蠟狀芽孢桿菌發(fā)酵液、綠針假單胞菌發(fā)酵液，低溫負壓干燥，得蠟狀芽孢桿菌菌粉、綠針假單胞菌菌粉；

（2）按蠟狀芽孢桿菌、綠針假單胞菌的菌落形成單位數(shù)目比為1:5-20（優(yōu)選菌落形成單位數(shù)目比為1：10），將步驟（1）所得蠟狀芽孢桿菌菌粉和綠針假單胞菌菌粉混合配制成生防菌肥發(fā)酵的復合菌劑。