[發明專利]一種快速人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法

在審

• 申請號: 201410212525.1
• 申請日: 2014-05-20
• 公開（公告）號: CN104087653A
• 公開（公告）日: 2014-10-08
• 發明（設計）人: 陳麗靜;楊妮娜;孫少坤;馬鏑;孫紅梅;蘇瑛;郭志富;馬慧
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 沈陽科威專利代理有限責任公司 21101
• 代理人: 楊濱

1.一種快速人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：

A.培養容器準備：采用平板培養皿作為離體培養容器，在培養皿中放置濾紙2-3張；

B.培養基配制：采用馬鈴薯燕麥淀粉培養基培養百合灰霉病菌，高壓滅菌鍋121-125℃滅菌25分鐘，超凈工作臺上將滅菌后的培養基分裝到平板培養皿中，靜置放涼；

C.待測百合的采集：選取現蕾初期的健康且無百合灰霉病病原菌感染的百合株苗，其上須有6-9片健康葉片，分別從上、中、下3個部位剪取完整的百合葉片；

D.病原菌采集：取百合典型感病葉片，分離純化病原菌，經鑒定是灰霉菌后，在馬鈴薯燕麥淀粉培養基上培養7d，用于接種健康的百合葉片；

E.接種方法：采用以下的菌絲塊接種法，孢子液噴霧接種法或摩擦接種法來接種百合灰霉病原菌；

所述菌絲塊接種法：用直徑為0.5cm的打孔器將在馬鈴薯燕麥淀粉培養基上生長7d的灰霉菌打成菌絲塊，將其接種于待測百合葉片；

所述孢子液噴霧接種法：用無菌水將在馬鈴薯燕麥淀粉培養基上生長7d的灰霉菌孢子洗出，并調成濃度為1×10⁵~5×10^5?cfu/mL的菌懸液，噴霧接種于待測百合葉片；

所述摩擦接種法：挑取馬鈴薯燕麥淀粉培養基上生長7d的灰霉病原菌與適量石英砂及無菌水混合均勻，用無菌的小指形管沾取調制好的孢子葉，避開主葉脈涂抹于待測葉片上，摩擦數次至形成細小的傷口；

F.培養：接種好病原菌的百合葉片葉柄傷口處用濕潤的棉花包裹，將接種好的百合葉片置于培養皿中，噴灑適量無菌水，于25℃（常溫）條件下保濕培養；

G.觀察鑒定：分別于3、5、7、9d調查葉片發病情況。

2.根據權利要求1所述的人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：在E.接種方法中，選擇菌絲接種法接種。

3.根據權利要求1所述的人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：所述的平板培養皿為9cm平板培養皿。