[發明專利]一種血液降解得到并檢測單糖的方法在癌癥檢測中的應用

有效

• 申請號: 201410211976.3
• 申請日: 2014-05-14
• 公開（公告）號: CN103969371A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 張麗娟;曾璇;蘭瑩;邱培菊;曾洋洋;徐玲玲;周紫婧;韓章潤
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥領域，涉及一種血液降解得到并檢測單糖的方法在癌癥檢測中的應用。

背景技術

癌癥是全世界首要的死因之一。2004年，癌癥死亡人數達740萬(約占所有死亡人數的13％)，肺癌、胃癌、結腸癌、肝癌和乳腺癌是每年大多數癌癥死亡的罪魁禍首。據世衛組織估計，如不進行干預，2005年至2015年期間將有8400萬人死于癌癥。癌癥是細胞不受控制的增長和擴散。它可影響人體的幾乎任何部分。腫瘤常常侵入周圍的組織并可轉移到其它部位。通過手術、放療或化療，很大一部分癌癥可以治愈，尤其如果在早期發現。對于那些在癌細胞擴散之前就被發現并接受治療的早期肺癌病人，平均生存率令人滿意；但70％～80％癌證患者當出現臨床癥狀就診時已是中、晚期，失去了治愈機會，生存率很低。

癌癥的診斷方法包括影像學檢查，病理學檢查等，均是在癌癥充分發展、腫瘤足夠大時，方可有效地診斷。因此，提高癌癥的治療效果、降低死亡率的關鍵是早期檢測。最理想的早期檢測是不需活檢的血液分析。以實驗數據為依據的理論分析指出，目前依靠腫瘤分泌到血液中的癌細胞生物標志物進行癌癥診斷要求腫瘤不小于20.44mm³，此時腫瘤已有10.1年的生長歷史。因此，最理想的狀態是在腫瘤還未長到20.44mm³時就能通過常規體檢抽血進行早期血液檢測。提高血液中癌生物標志物的檢測靈敏度，使早期檢測成為可能則需要新思路。

生物信息傳遞過程是從DNA到RNA再到蛋白。人類基因的數目約為25000個，每個基因對應著相應的蛋白。蛋白形成以后，會合成糖、脂及各種化合物。反過來，蛋白又受到200多種糖、脂及各種化合物的修飾。蛋白的許多功能由這些修飾所決定。組學研究已找到了系列可能的癌癥標記物，但離臨床應用還有距離。檢測癌癥病人血液中MicroRNA對多種癌癥顯示出高度的選擇性。然而對早期癌癥病人的靈敏度遠不如晚期病人，這也許會限制此方法在癌癥早期診斷的應用。總體來說，組學分析比現行的癌癥生物標志物全面，但一般來說復雜、昂貴、且需大量的數據處理，目前還達不到簡單，快速，穩定，可靠、廉價的臨床要求。

目前已有多種癌癥血液糖生物標志物的報導，然而利用現行的多步驟的分離與鑒定技術從多于7000個糖結構中找出靈敏度與選擇性都符合臨床要求的癌癥早期診斷的血液生物標志物非常困難，很難在短期內有臨床應用價值。

發明內容

鑒于此，本發明的目的在于：提供一種血液降解得到并檢測單糖的方法在癌癥檢測中的應用，特別是用于檢測癌癥病人或正常人血液降解后所得單糖的含量。同時測定血液中的單糖，如葡萄糖，及降解后產生的單糖，包括葡萄糖、甘露糖、半乳糖，氨基葡萄糖，氨基半乳糖，木糖，巖藻糖，葡萄糖醛酸，可以得到更全面的癌癥病人血液的糖結構變化信息，可以區分正常人和癌癥病人，還可區分不同癌癥。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

1.一種血液降解得到并檢測單糖的方法在癌癥檢測中的應用，所述的降解得到并檢測單糖的方法步驟包括：

(1)取樣品至安瓿瓶，每管加1mL2M C₂HF₃O₂；

(2)封管，105℃油浴6h，得水解樣品溶液；

(3)將水解樣品溶液冷卻至室溫，冷凝濃縮除C₂HF₃O₂；

(4)每管加100uL甲醇，離心濃縮除殘留C₂HF₃O₂，重復三次；

(5)得到的干燥樣品每管用水溶，再加NH₃·H₂O調pH至8-14，充分混勻后在室溫下靜置，再加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)水浴；

(6)取出反應物冷卻至室溫，加HAc中和；

(7)每管加入CHCl₃萃取后棄下層CHCl₃層，重復三次，將得到的水層過0.22um濾膜，待用于高效液相色譜分析；

色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18，0.1M磷酸鹽(13.6gKH₂PO₄，1.8gNaOH)(pH6.7)緩沖液-乙腈(體積比83∶17)等度洗脫，流速：1.0mL/min，檢測波長：245nm，進樣體積：20uL；