[發明專利]一種抑制漆樹外植體污染和褐變的方法

有效

• 申請號: 201410210142.0
• 申請日: 2014-05-19
• 公開（公告）號: CN104026008A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 何承忠;李旦;趙月明;段安安;祝建兵;廖聲熙;許玉蘭
• 申請（專利權）人: 西南林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司 53114
• 代理人: 唐德林

技術領域

本發明涉及植物組培技術領域，尤其是組培中抑制外植體的污染和褐變的方法。

背景技術

漆樹（Toxicodendron?vernicifluum）是漆樹科（Anacardiacceae）漆屬植物，因產生漆而得名，是我國特有的最具民族特征的經濟林木，而生漆是是目前世界上唯一來自綠色植物，在生物酶催化作用下，常溫能固化成膜的生物高分子涂料，已廣泛用于軍工、化工、輕工、石油、采礦、美術等方面，也是我國重要的出口農產品。由于漆樹聚集了天然涂料、油料和木材等多種用途，不僅是我國重要的特用經濟樹種，也是優良的生態樹種，對我國貧困山區的經濟發展和農民經濟收入增加以及生態環境建設都有著重要的作用。

漆樹屬于枝插較為困難的樹種，在良種苗木培育中，主要采用種子繁殖的實生育苗和根萌繁殖的無性育苗。但漆樹屬異花授粉的經濟樹種，采用種子繁殖的實生育苗，必然產生較大分化，其優良品質的遺傳特性難以保持。同時，漆樹存在天然敗育現象，其繁育方式主要為埋根育苗。埋根育苗的成苗率低，繁殖速度慢，采集根段對母樹易造成一定的傷害，影響產量，不能滿足大規模繁殖的生產要求。

當前，快速高效的苗木培育技術成為了推廣漆樹優良品種和優良單株的瓶頸。因此，探索一條在不損害、不降低漆樹優良品種種性的前提下，能滿足生產要求的大規模苗木繁殖方法是當前漆樹產業發展中急需解決的問題。而利用植物組織培養技術快速育苗是一個新興的生物技術應用領域，由于取材對母體無傷害且用量少，繁殖系數高，繁殖速度快，已成為許多植物商品化育苗的重要途徑。

有關漆樹組培快繁技術的研究報道很少，到目前為止，漆樹組織通過愈傷化、繼代、分化及生根進而培育出植株的完整組培快繁技術體系尚未建立。其主要問題是，在進行漆樹的組織培養試驗中，存在嚴重的細菌和真菌污染問題，污染率達到100%。同時，由于漆樹的漆酚含量較高，組織培養中出現嚴重的外植體褐變現象。其莖、葉的切片組織從表面向培養基釋放褐色物質以至培養基逐漸變成成褐色，外植體隨之進一步變褐而死亡，不能存活。

因此，為了建立高效的漆樹組培快繁技術體系，首要解決漆樹外植體的污染和褐變問題。

發明內容

本發明要解決的是在高效的漆樹組培快繁技術體系中，漆樹外植體的污染和褐變問題，從而提出一種可有效去除表面細菌和內生真菌，防止外植體褐變的方法。

本發明公開了一種抑制漆樹外植體污染和褐變的方法，其特征在于包括使用苯扎氯銨來消毒處理漆樹外植體步驟和將消毒好的材料接種在添加半胱氨酸的White培養基上暗培養的步驟。

步驟具體如下：

（1）采取生長健壯、無病蟲害的漆樹1?~?2年生莖段或幼嫩葉片，用毛刷蘸肥皂水輕拭，刷凈材料表面污物，置于燒杯中，自來水沖洗2?h；

（2）轉入超凈工作臺內，75%乙醇浸泡20?s，無菌水沖洗3?min；

（3）用1%苯扎氯銨浸泡1?min，無菌水沖洗3?min；

（4）用0.1%升汞消毒20?min，無菌水沖洗5?~?8次，每次2?min；

（5）用消毒過的濾紙吸干水分，將材料切割為1?cm莖段或1cm?×1cm的方塊；

（6）接種于添加半胱氨酸的White培養基，比例為1?L的White培養基附加100?mg?半胱氨酸，pH調節為5.8；

（7）暗培養2周，溫度20?±?2℃；

（8）轉于光照強度1000?~?2000?Lux，光照時間12?h/d，溫度25±2℃的培養條件下常規培養。

在本發明中通過使用苯扎氯銨的消毒處理，有效去除漆樹外植體材料的表面細菌和內生真菌；二是將消毒好的材料接種在添加半胱氨酸的White培養基上暗培養，防止漆樹外植體的褐變，步驟（1）~（4）目的在于抑制漆樹外植體的污染；步驟（5）~（7）目的在于抑制漆樹外植體的褐變。