[發明專利]非病毒載體與CXCR4質粒的復合物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201410209647.5
• 申請日: 2014-05-18
• 公開（公告）號: CN103993028A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 胡瑜蘭;高建青;黃冰
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;A61K48/00;A61P35/00;A61P25/28
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種非病毒載體與CXCR4質粒的復合物及其制備方法和應用。?

背景技術

隨著生物技術的發展，細胞療法作為一種新的治療手段已經得到了越來越廣泛的應用。細胞治療通常采集人體自身細胞，經過體外培養，使其數量成千倍增多，然后再回輸到人體進行治療。目前，細胞療法在慢性退行性疾病，退行性疾病，免疫及惡性腫瘤疾病中都已經得到應用。?

然而，目前通過靜脈注射的細胞往往容易聚集于肺、肝部等非靶部位，這會導致治療時需要移植大量細胞，而大量細胞在非靶組織的聚集會帶來安全隱患。成為許多細胞療法的障礙之一。如何使更多的細胞向受損部位遷移，達到更好的治療效果成為亟待解決的問題之一。?

發明內容

為克服以上問題，本發明提供一種CXCR4質粒,及非病毒載體與CXCR4質粒的復合物，及其制備方法和應用。?

首先，本發明提供了一種非病毒載體與CXCR4質粒的復合物。?

優選的，復合物的粒徑為5nm-5μm,優選為150-250nm或150-300nm。?

非病毒載體與CXCR4質粒的復合物，載體優選為精胺修飾的普魯蘭糖(Spermine-Pullulan)，聚乙烯亞胺修飾的殼聚糖(chitosan-PEI),聚乙烯亞胺修飾的環糊精(PEI-β-cyclodextrin)，lipofectamine2000，載體與CXCR4質粒的質量比為1-200：1，優選為1-50:1。?

其中，載體Spermin-Pullulan與CXCR4質粒的質量比為1-10，chitosan-PEI與CXCR4質粒的質量比為5-50，PEI-β-cyclodextrin與CXCR4質粒的質量比5-20，lipofectamine2000與CXCR4質粒的質量比為1-10。?

其次，本發明還提供了非病毒載體與CXCR4質粒的復合物的制備方法。?

非病毒載體與CXCR4質粒的復合物的制備方法：包括如下步驟：?

(1)將非病毒載體稀釋到0.1-4mg/ml；?

(2)將CXCR4質粒稀釋至0.001-1mg/ml(優選100ug/ml)；?

(3)將非病毒載體加入CXCR4質粒溶液，靜置孵育制得非病毒載體與CXCR4質粒的復合物(納米粒)。?

優選的，步驟3)靜置孵育時間為5-60分鐘；非病毒載體和CXCR4的質量比為0.1-1000：1。?

優選的，所述的非病毒載體選自聚陽離子，脂質體，囊泡，樹突狀大分子化合物中的一種。?

更優選的，所述非病毒載體為精胺修飾的普魯蘭糖(Spermine-Pullulan)，聚乙烯亞胺修飾的殼聚糖(chitosan-PEI),聚乙烯亞胺修飾的環糊精(PEI-β-cyclodextrin)，lipofectamine2000，非病毒載體與CXCR4質粒的質量比為1-50:1。其中，載體Spermine-Pullulan與CXCR4質粒的質量比為1-10優選的，Spermine-Pullulan與CXCR4質粒的質量比為2.16)，chitosan-PEI與CXCR4質粒的質量比為5-50，PEI-β-cyclodextrin與CXCR4質粒的質量比5-20，lipofectamine2000與CXCR4質粒的質量比為1-10(lipofectamine2000與CXCR4質粒的質量比為2.16)。?

更優選的，將載體Spermin-Pullulan稀釋到0.1-4mg/ml，CXCR4質粒稀釋到100ug/ml，將載體分別加入到等體積的DNA溶液中，吹打均勻，靜置孵育20min。?

另外，本發明還提供了非病毒載體與CXCR4質粒的復合物的應用。?

非病毒載體與CXCR4質粒的復合物用于改變細胞體內分布。?

非病毒載體與CXCR4質粒的復合物用于制備誘導細胞定向遷移藥物中的應用。?

非病毒載體與CXCR4質粒的復合物用于制備治療腦損傷藥物中的應用。?

非病毒載體與CXCR4質粒的復合物用于制備抗腫瘤藥物中的應用。?