[發明專利]用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體的方法

有效

• 申請號: 201410209371.0
• 申請日: 2014-05-19
• 公開（公告）號: CN104059111A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 邱建國;李茂星;賈正平;張汝學;張泉龍
• 申請（專利權）人: 邱建國;李茂星;賈正平
• 主分類號: C07H3/06
• 分類號: C07H3/06;C07H1/08
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 馬正良

技術領域

本發明涉及一種從玄參科植物地黃中分離純化制備甘露三糖單體的方法，即利用活性炭柱色譜法從地黃中分離純化制備高純度的甘露三糖單體的方法。

背景技術

地黃為玄參科植物地黃(Rehmannia glutinosa Libosch．)的新鮮或干燥塊根。地黃是我國常用的大宗中藥, 2010版《中國藥典》收載的90 多種成方制劑中有地黃，占收載成方制劑三分之一，如經典名方 “六味地黃丸”、“金匱腎氣丸”等。

現代研究表明地黃中含有復雜的化學成分，包括糖類、環烯醚萜苷類、苯乙醇苷類、紫羅蘭酮類、黃酮類、地黃腦苷類、甾乙醇類、氨基酸類等近百種，其中含量最高的是糖類成分。現代藥理研究表明，地黃中的藥效物質基礎之一甘露三糖具有促進造血細胞的增殖、提高免疫力、降血糖等作用。

地黃市場需求量一直很大，市場行情上漲，但是《中國藥典》目前不能有效地質控地黃，為了有效地保證地黃質量，必須進一步明確地黃的活性成分,得到不同成分單體。

1971年Tomoda等采用鮮地黃，用熱乙醇和熱水提取，以陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂交換得到中性部分，水蘇糖含量達到64.9 %，但沒有得到甘露三糖單體的報道。

目前文獻報道，地黃中甘露三糖的分離純化方法有水提醇析法、水蘇糖水解反應法、酶催化水解反應法。

水提醇析法：加4 倍水，沸水浸提6 h，提取2 次，將水提液進行70 %醇析處理后水蘇糖的含量大大降低，有利于甘露三糖的分離，為甘露三糖的精制提供了有效的工藝參數。（郭威，溫學森，王少云，趙宇. “地黃中活性成分甘露三糖提取工藝研究”，ACTA UNIVERSITATIS TRADITIONIS MEDICALIS SINENSIS PHARMACOLOGIAEQUE SHANGHAI，2007，21（6）：32-35）

水蘇糖水解反應法：先用鮮地黃制備得到水蘇糖，在pH2.5 、90 ℃和24 h條件下,水蘇糖水解成為甘露三糖，90.63 %的水蘇糖可以水解。水蘇糖降解生成三糖的方式有兩種:一是生成半乳糖和棉子糖,二是生成果糖和甘露三糖。（武衛紅，溫學森，趙宇. “甘露三糖的制備及其工藝優化”，中藥材，2007，30（7）：848-853）。

酶催化水解反應法：使用β-D-呋喃糖苷酶水解水蘇糖，得到白色粉末狀的甘露三糖，酶催化水解反應具有專屬性高，條件溫和，但需嚴格控制pH條件、酶的純度，否則無法得到純度很高的單體。（TomodaM, et al.Water soluble constituents of Rehmanniae Radix， Cabohydrates and acids of Rehmannia glutinosa， hueingensis. Chem1 Pharm1 Bull, 1971, 19 ( 7) :1455；姚新生，等.天然藥物化學. 北京:人民衛生出版社，2001: 831）

綜觀上述，從地黃中直接分離制備甘露三糖單體難度大，存在制備繁瑣、甘露三糖單體純度低等問題。如何快速、高效從地黃藥材中分離純化得到甘露三糖單體成分是目前地黃研究熱點。

發明內容

為此，本發明另僻蹊徑，其目的旨在提供一種用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體的

方法。該方法具有簡便、快速、低成本的特點。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種用活性炭梯度洗脫從地黃提取甘露三糖單體的方法，包括如下步驟：

（1）稱取地黃根，清洗干凈，粉碎；

（2）用干凈地黃根量的10倍量的水超聲提取或水煎煮提取，每次1 h，合并所得藥液，濾過；

（3）濾液減壓濃縮干燥，得干浸膏；

（4）活性炭做為色譜柱固定相，取活性炭用水拌勻，濕法裝柱，所用柱內徑為3.5 cm，

柱長40 cm；

（5）稱取浸膏，用重蒸水完全溶解后，在常壓下在1- 6 ml/min的流速下上活性炭色譜柱，色譜柱中活性炭的重量為浸膏重量的1 -12 倍；

（6）待上樣完畢，在3- 8 ml/min的流速下，先用重蒸水沖洗至無色，再用5 %、10 %、20 %、15 %乙醇梯度洗脫4 倍-5 倍量柱體積，收集15 %乙醇流份；

（7）將15 %乙醇洗脫溶液在壓力-5.7 MPa，溫度 -70 ℃減壓冷凍干燥；或壓力為，溫度30 ℃，減壓低溫加熱干燥得甘露三糖單體產品。