[發明專利]一株黑曲霉NY-1及提高其殺蟲活性的改進技術和應用

有效

• 申請號: 201410208342.2
• 申請日: 2014-05-17
• 公開（公告）號: CN103992955A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 李昉
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P7/00;C12R1/685
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技術領域

本發明涉及化學表觀遺傳修飾技術，更具體地，是一株黑曲霉菌NY-1菌株及提高其殺蟲活性的改進技術和應用。菌株NY-1在被化學表觀遺傳修飾劑作用后，其發酵液的提取物具有更高的殺蟲活性。?

背景技術

共生真菌表現出豐富的次生代謝能力，部分次生代謝產物也表現出殺蟲活性，但是應用藥用植物內生菌發酵法生產天然殺蟲藥物時，一方面內生菌脫離植物體后，往往次生代謝停止或延緩；另一方面內生菌在自生和共生條件下代謝途徑會有所差異。Bok?J.W等人在研究巢曲霉(Aspergillus?nidulans)的基因組時發現，該菌基因組內有可產生1個萜類、2個吲哚生物堿、14個非核糖體多肽以及27個聚酮類化合物的基因存在，但是當在實驗條件下發酵培養時，卻只能表達出幾個次級代謝產物，嚴重阻礙了真菌天然藥物的研究與發展(Chem?Biol,2006,13(1):31-37.)。?

曲霉屬(Aspergillus)是一類在陸地、海洋等各種環境中都廣泛分布的真菌，其體內豐富多樣的代謝途徑使得該屬的很多菌株被用于生產活性酶。除此之外已有的文獻報道表明該屬的有些菌株還具有特異的殺蟲活性。黃曲霉(Aspergillus?flavus)代謝產生的黃曲霉毒素就是一種昆蟲化學絕育劑；曲酸不僅能影響昆蟲的變態，而且可以提高煙堿的殺蟲效果；雜色曲霉(Aspergillus?versicolor)形成的雜烯亞胺對果蠅成蟲有擊倒作用。化學表觀遺傳修飾劑的在天然藥物領域的應用為這一問題的解決提供了一種具有前景的方法。表觀遺傳學(Epigenetics)是指在DNA序列不發生改變的情況下，基因的表達和功能發生了可遺傳的改變，而最終導致了生物表型的變化，這種改變在發育和細胞增殖過程中能夠穩定地遺傳下去。相對于分子生物學基因調控和其它沉默基因激活技術，該方法具有快速、簡便、效果明顯、成本低等優點。化學表觀遺傳修飾是最近幾年正在逐漸發展的真菌次生代謝產物研究新技術，其主要是應用化學小分子(組蛋白脫乙酰酶抑制劑和DNA甲基化酶抑制劑)修飾真菌異染色質，激活沉默次生代謝途徑基因簇轉錄，以獲得新型的功能分子(Nat.Prod.Rep.2010,27(1),11–22.)。Williams?R.B等利用5-AZA誘導Cladosporium?cladosporioides得到三種氧化脂類化合物(Org?Biomol?Chem,2008,6(11):1895-1897.)。Jon?C等利用SAHA處理黑曲霉(Aspergillus?niger)得到一種從未在任何生物體內合成的化合物Nygerone?A(Org.Biomol.Chem.,2009,7:435–438.)。Robert?H.C的課題組主要對真菌的小分子表觀遺傳修飾劑的作用進行研究。該課題組利用9種DNMT和HDAC小分子抑制劑對12種真菌(包括：Aspergillus?flavus、Aspergillus?westerdijkiae、Cladosporium?cladosporioides、Clonostachys?sp.、Diatrype?sp.、Penicillium?chrysogenum、Penicillium?citrinum、Rhizopus?sp.、Verticillium?psalliotae以及另外三種不明絲狀真菌)進行誘導，結果表明，其中11種均對表觀遺傳修飾做出了反應，有的部分次級代謝產物產量提高，有的激活了新的化合物合成等(Nat.Prod.Rep.2010,27,11-22.)。?

本發明采用化學表觀遺傳修飾技術激活一株黑曲霉NY-1的殺蟲功能性沉默次生代謝途徑，提高黑曲霉NY-1的殺蟲活性。使用化學表觀遺傳修飾劑激活菌株的次級代謝產物，從而提高菌株的殺蟲活性的方法具有靶點明確、效果明顯的特點，可應用于微生物資源的開發利用中。?

發明內容

本項發明目的在于提供一株黑曲霉NY-1菌株及提高其殺蟲活性的改進技術和應用。?

為充分達到以上目的，本發明采用的技術方案為：一株黑曲霉NY-1菌株，黑曲霉NY-1(Aspergillus?niger)保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期：2014年4月28日，保藏號：CCTCC?NO:M?2014169。?