[發明專利]提高蛋白質可溶性的肽及其用途

有效

• 申請號: 201410204226.3
• 申請日: 2014-05-14
• 公開（公告）號: CN104163856B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 張大慈
• 申請（專利權）人: 張大慈
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N15/70;C07K19/00;C12N9/22
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司72002
• 代理人: 左路

技術領域

本發明涉及人工肽及其用途。

背景技術

大部份具有潛在臨床或工業價值的蛋白質之供給往往受限于其低自然可得性。隨著現代基因體學、蛋白質組學和生物信息學的進步，使用重組技術產出的蛋白質似乎可保證無限供應重組蛋白。然而，異源蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達仍然是蛋白生產的一個嚴重瓶頸。在大腸桿菌中克隆(clone)基因的過度表達可導致細胞內蛋白質不可溶凝集的形成，其在光學顯微鏡下清晰可見。一些與宿主細胞、生長條件和該特定蛋白質性質有關的參數都有可能會影響蛋白質的可溶性。因此，能夠增強蛋白質表達且同時能簡化純化過程的新技術對于需要大規模產量的蛋白質非常重要。

發明內容

利用親和性標簽與目標蛋白融合可增加蛋白質表達量并提升蛋白質純化效率，可克服低表達障礙。

本發明設計一肽片段以增加一目標融合蛋白之可溶性。該肽之氨基酸序列實例包括但不限于SEQ?ID?NO:1。

由臺灣三棘鱟(Tachypleus?tridentatus)血漿中分離所得之鱟細菌辨識凝集素(bacteria?recognizing?lectin,BRL)為一種脂多糖結合蛋白質。細菌辨識凝集素之氨基酸序列實例包括但不限于SEQ?ID?NO:2。

人類嗜酸性白血球核糖核酸酶(human?eosinophil?ribonuclease)屬于核糖核酸酶A超家族，由嗜酸性白血球在發炎期間大量分泌。靈長類動物嗜酸性白血球核糖核酸酶序列系取自NCBI數據庫并與人類的嗜酸性白血球核糖核酸酶比對(圖4)。人類嗜酸性白血球核糖核酸酶與靈長類動物嗜酸性白血球核糖核酸酶有高度相似(序列相同度高于86％)。人類嗜酸性白血球核糖核酸酶系由133個氨基酸組成，其等電點(isoelectricpoint)為10.8。人類嗜酸性白血球核糖核酸酶之氨基酸序列實例包括但不限于SEQ?ID?NO:9。

本發明已在大腸桿菌表達系統中創造一種新穎重組蛋白：重組細菌辨識凝集素(rBRL)，其包含氨基端39個氨基酸之肽片段及羥基端128個氨基酸之細菌辨識凝集素，例如SEQ?ID?NO:3。在SEQ?ID?NO:3中第1個氨基酸(M)及第41到第42個氨基酸(EF)是從pET23a載體獲得之殘基且可于使用不同載體時被替換，甚至于本發明之一實施方案中可不存在。此外，在SEQ?ID?NO:3末端的6個殘基(HHHHHH)可作用為純化標簽且可以任何具相似功能的其它序列將其替換，甚至于本發明之一實施方案中可不存在。根據以上所述，應注意到本發明也提供一種由氨基酸序列SEQ?ID?NO:4組成之重組細菌辨識凝集素。

本發明也已在大腸桿菌表達系統中創造出一種新穎重組蛋白：重組嗜酸性白血球核糖核酸酶(reRNase)，其包含氨基端39個氨基酸之肽片段及羥基端133個氨基酸之人類嗜酸性白血球核糖核酸酶，例如SEQ?ID?NO:10。在SEQ?ID?NO:10中第1個氨基酸(M)及第41到第42個氨基酸(EF)是從pET23a載體中獲得之殘基且可于使用不同載體時被替換，甚至于本發明之一實施方案中可不存在。此外，在SEQ?ID?NO:10末端6個殘基(HHHHHH)可作用為純化標簽且可以任何具相似功能的其它序列將其替換，甚至于本發明之一實施方案中可不存在。根據以上所述，應注意到本發明也提供一種由氨基酸序列SEQ?ID?NO:11所組成之重組嗜酸性白血球核糖核酸酶。

本領域技術人員將了解到，任何以上氨基酸序列具相似功能的突變體都包含在本發明之范疇中。

添加人工肽SEQ?ID?NO:1可成功增加細菌辨識凝集素或嗜酸性白血球核糖核酸酶的表達并簡化純化步驟。

除非另外特別加以定義，于此敘述中所用的名詞將具有本領域技術人員可了解之普通且常見之含意。