[發明專利]鼠SPATA16基因多克隆抗體及其制備方法

在審

• 申請號: 201410203598.4
• 申請日: 2014-05-14
• 公開（公告）號: CN105085675A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 黃衛人;余州;吳漢偉;桂耀庭;蔡志明
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 向武橋;彭家恩

技術領域

本申請涉及一種鼠SPATA16基因多克隆抗體及其制備方法。

背景技術

SPATA16基因是一個新基因，研究表明，其在小鼠精子發生過程中具有一定的功能作用，因此，有必要對其進行更進一步的研究。

發明內容

本發明提供一種新的鼠SPATA16基因多克隆抗體及其制備方法。

本發明提供一種鼠SPATA16基因多克隆抗體的制備方法，包括如下步驟：

a)用PCR方法擴增序列如SEQIDNO:1所示的SPATA16基因和序列如SEQIDNO:2所示的pET32a表達質粒；

b)將SPATA16基因連接到pET32a表達載體中構建重組質粒；

c)將所述重組質粒轉入BL21感受態細菌，經過培養、誘導、裂解和純化，得到特異性目的蛋白；

d)免疫兔子后，采血，純化抗體血清，得到多克隆抗體。

所述步驟a)中，PCR擴增時，SPATA16基因上游引物如SEQIDNO:3所示，SPATA16基因下游引物如SEQIDNO:4所示；pET32a質粒上游引物如SEQIDNO:5所示，pET32a質粒下游引物如SEQIDNO:6所示。

所述步驟c)中，培養時，將含有所述重組質粒的菌液加入到高壓滅菌的無抗生素LB培養基中，并加入氨芐抗生素。

所述步驟c)中，通過IPTG誘導。

所述步驟c)中，利用裂解液進行裂解，所述裂解液包括TrisHCl、NaCl和EDTA。

所述步驟c)中，所述純化包括包涵體蛋白處理和梯度透析。

一種鼠SPATA16基因多克隆抗體，所述抗體識別的蛋白序列如SEQIDNO:7所示。

本發明的有益效果是：通過制備基因SPATA16的多克隆抗體，該抗體能夠特異性識別目的蛋白，從而便于研究目的蛋白的表達和定位等。

附圖說明

圖1是SPATA16克隆鑒定圖，其中，SPATA16截取片段大小為450bp；片段大小與spata16大小一致；

圖2是NovagenIDA-Ni樹脂純化His-Spata16-150aa蛋白純化后的電泳圖；

圖3是SPATA16在不同小鼠睪丸細胞系中的表達特征圖，其中，1表示小鼠睪丸總蛋白；2表示TM4細胞系(小鼠睪丸支持細胞)；3表示CRL-2053細胞系(小鼠精原細胞)；4表示CRL-2196細胞系(小鼠精母細胞)；

圖4是SPATA16在293T的亞細胞定位圖；在293T細胞中，SPATA16主要定位在細胞核中；

圖5是SPATA16在小鼠睪丸組織中的亞細胞定位分析圖；在小鼠組織中，胞核中表達信號強度遠大于胞漿，表明SPATA16定位于小鼠睪丸組織細胞核；

圖6是SPATA16-150aa抗體檢測mSPATA16亞細胞定位圖，其中，mSPATA16主要表達于HEK293細胞的細胞核。

具體實施方式

下面通過具體實施方式結合附圖對本發明作進一步詳細說明。

在一種實施方式中，鼠SPATA16基因多克隆抗體的制備方法包括如下步驟：

a)用PCR方法擴增序列如SEQIDNO:1所示的SPATA16基因和序列如SEQIDNO:2所示的pET32a表達質粒；其中，SPATA16基因序列是現有序列，其登錄信息是：NM_027583，該基因的蛋白序列如SEQIDNO:8所示，其登錄號是：NP_081859。

b)將SPATA16基因連接到pET32a表達載體中構建重組質粒；連接時，可以采用T4連接酶。

c)將所述重組質粒轉入BL21感受態細菌，經過培養、誘導、裂解和純化，得到特異性目的蛋白。

d)免疫兔子后，采血，純化抗體血清，得到多克隆抗體。

如圖1至圖6所示，在另一種實施方式中，鼠SPATA16基因多克隆抗體的制備方法包括如下步驟：

1、通過不依賴連接酶的克隆方法(LIC)重組質粒

a)設計質粒pET32a以及基因SPATA16mRNA的引物，引物如表1所示：

表1質粒pET32a和基因SPATA16的合成引物