[發(fā)明專利]一種熱穩(wěn)定性和分泌效率提高的蔗糖異構酶突變體及其制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410201468.7 | 申請日： | 2014-05-06 |
| 公開（公告）號： | CN104059901A | 公開（公告）日： | 2014-09-24 |
| 發(fā)明（設計）人： | 吳敬;程勝;段緒果 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/90 | 分類號： | C12N9/90 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 熱穩(wěn)定性 分泌 效率 提高 蔗糖 異構酶 突變體 及其 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.兩種蔗糖異構酶突變體，其特征在于對蔗糖異構酶中B因子最高的氨基酸進行定點突變。
2.權利要求1所述的突變體，其特征在于所述突變氨基酸的B因子最高。
3.根據(jù)權利要求2所述的突變體，其特征在于B因子最高的氨基酸突變成兩種不同氨基酸。
4.根據(jù)權利要求3所述的突變體，其特征在于蔗糖異構酶576位置處的K分別突變?yōu)镻或D。
5.根據(jù)權利要求1-4所述的突變體，其特征在于所述改造后蔗糖異構酶為普城沙雷氏桿菌蔗糖異構酶兩種突變體K576P和K576D。
6.獲得權利要求1-4任一所述突變體的方法，包括如下步驟：
1)對蔗糖異構酶晶體結構進行分析，確定B因子最高的氨基酸，并分析突變成何種氨基酸可以降低B因子；
2)設計定點突變所用引物，以攜帶蔗糖異構酶編碼基因的載體為模板進行突變并構建兩種突變體的質粒載體；
3)將突變質粒轉化進宿主細胞；
4)挑選陽性克隆進行發(fā)酵培養(yǎng)，純化獲得蔗糖異構酶突變體。
7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于所述質粒載體為pET系列，pGEX系列，pPICZ系列，或pAN系列，或pUB中的任一一種。
8.根據(jù)權利要求7所述的制備方法，其特征在于所述宿主細胞為細菌、酵母和真菌細胞。
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