[發(fā)明專利]一種檢測白血病干細胞是否存在的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410201340.0
• 申請日: 2014-05-13
• 公開（公告）號: CN105087762B
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 洪登禮;周向成;范丹;李佐青;李真
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/04
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務(wù)所(普通合伙) 31218
• 代理人: 施春花;翟羽

本發(fā)明公開了一種檢測白血病干細胞是否存在的試劑盒，所述試劑盒通過檢測造血干細胞程序即HSCB程序來檢查白血病干細胞的存在，所述HSCB程序包含以下基因：HOXB4、BMI1、TEL、AML1、PTEN、IKZF1、MLL、GFI1、TCF3、EBF1、SPI1、IKZF1、DNTT、PAX5、VPREB1、RAG1/2、LEF1和IGLL1。本發(fā)明設(shè)計的HSCB程序能忠實地反映造血細胞的全轉(zhuǎn)錄組，判定造血細胞群的干性特征和分化階段，如果白血病細胞在HSCB的表現(xiàn)接近正常造血干細胞和/或早期祖細胞，就可以判斷LPC的存在，預(yù)示病人的預(yù)后差。本發(fā)明所設(shè)計的試劑盒檢測方便，準確可靠，可以廣泛用于白血病的診斷，檢測LPCs是否存在和判斷病人的預(yù)后。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及白血病診斷試劑盒，更具體地講，涉及利用新發(fā)現(xiàn)的干細胞程序開發(fā)檢測白血病干細胞是否存在的試劑盒。

背景技術(shù)

現(xiàn)普遍認為白血病復(fù)發(fā)的主要原因是由于現(xiàn)有的治療方法無法清除體內(nèi)的白血病干細胞(leukemic propagating cells,LPCs)，檢測LPCs是否存在是判斷白血病預(yù)后的重要途徑。目前只有功能實驗(如移植給免疫缺陷小鼠)才能判斷LPCs的存在，但是實驗要求苛刻、耗時很長，不利于臨床應(yīng)用。目前也沒有確實的細胞表面分子可以檢測LPCs。

作為干細胞，LPCs有自我更新能力和一定的分化能力，相應(yīng)地，LPCs一定有干細胞程序(包括自我更新所需程序)。因此本發(fā)明根據(jù)功能已知的諸基因設(shè)計了一個造血干細胞(hematopoietic stem cell,HSC)程序，利用普通的定量PCR技術(shù)檢測該程序基因在白血病細胞的表達譜，就可以快速準確地判定LPCs是否存在，并因此判斷病人的預(yù)后。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是，提供一種檢測白血病干細胞是否存在的試劑盒。

本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是，提供HSCB程序在制備檢測白血病干細胞是否存在的試劑盒中的應(yīng)用。

為了解決上述第一個技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種檢測白血病干細胞是否存在的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒通過檢測造血干細胞程序即HSCB程序來檢查白血病干細胞的存在，所述HSCB程序包含以下基因：HOXB4、BMI1、TEL、AML1、PTEN、IKZF1、MLL、GFI1、TCF3、EBF1、SPI1、IKZF1、DNTT、PAX5、VPREB1、RAG1/2、LEF1和IGLL1。

作為一個優(yōu)選方案，所述試劑盒包含以下引物(SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.36)：

HOXB4:正向引物5′-TGAGCACGGTAAACCCCAATTACG-3′；

反向引物5′-AGAGCGCGTGGGCGATCTC-3′；

BMI1:正向引物5′-AGAACTGGAAAGTGACTCTGGG-3′；

反向引物5′-AAATGTGAGGAAACTGTGGATG-3′；

TEL:正向引物5′-TTGAAATGAATGGCAAAGCT-3′；

反向引物5′-AGGGTGGAAGAATGGTGAAA-3′；

AML1:正向引物5′-GCCAGAAGGAAGTCAACCT-3′；

反向引物5′-TGAAAACATCCAGCCAAGA-3′；

PTEN:正向引物5′-TCAGTGGCGGAACTTGCAATCCT-3′；

反向引物5′-ACACACAGGTAACGGCTGAGGGA-3′；

IKZF1:正向引物5′-CTACCTGACCAACCACATCGC-3′；