[發明專利]從野馬追中快速分離純化單體化合物的方法

有效

• 申請號: 201410201195.6
• 申請日: 2014-05-14
• 公開（公告）號: CN103965276A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 鄢貴龍;紀麗蓮;羅玉明;汪偉;韓明海
• 申請（專利權）人: 淮陰師范學院
• 主分類號: C07H19/067
• 分類號: C07H19/067;C07H1/08;C07D239/54;C07D473/34
• 代理公司: 淮安市科翔專利商標事務所 32110
• 代理人: 韓曉斌

技術領域

本發明屬于天然藥物化學領域，具體涉及一種從中藥野馬追中快速分離純化尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶的方法。

背景技術

野馬追又名白鼓釘、化食草等，是菊科澤蘭屬植物輪葉澤蘭（Eupatorium lindleyanum DC.）的干燥地上部分。中醫藥理認為野馬追味苦、性平，具有清熱解毒、定喘祛痰和降血壓等功效，江蘇蘇北民間廣泛用其作為清熱解毒藥，在臨床上也常用于治療支氣管炎、氣管炎、勞傷咳嗽、吐血咯血等病。

現未有文獻報道從野馬追中分離純化尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶的方法。現有文獻報道從其它中草藥中分離純化尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶等的方法常采用柱層析方法。鄒崢嶸等[海地瓜化學成分研究，中國天然藥物, 2005年第6期]采用85%浸提，大孔樹脂分離和反復硅膠柱層析的方法分離純化，根據化合物的理化特征和光譜數據鑒定其結構，從海地瓜中分離到尿嘧啶、胸腺嘧啶等化合物。馬榮等[忍冬藤正丁醇萃取部位的化學成分,中國藥科大學學報, 2010年第4期] 以70%乙醇回流提取，溶劑萃取和硅膠柱分離的方法，從忍冬藤的醇提物的正丁醇萃取部位分離出尿嘧啶核苷。陳泉等[中藥淡竹葉的化學成分研究(II)，沈陽藥科大學學報，2005年第4期] 利用硅膠柱、大孔吸附樹脂柱、Sephadex LH-20柱和制備薄層色譜法等分離手段,從淡竹葉的降血脂活性部位中分離得到4個化合物，經理化常數和光譜分析分別鑒定為胸腺嘧啶等化合物。

上述方法大多需要反復的柱層析，操作復雜，耗時長，溶劑消耗量大，而且樣品損失大。

高速逆流色譜（High-Speed Counter-Current Chromatography，HSCCC）HSCCC是上世紀80年代出現的一種新型的、連續高效的液-液分配色譜，是建立在一種特殊的動力學平衡現象——單向性流體動力平衡（HDES）體系之上的一種分離方法。由于HSCCC不需任何固體支撐體作為固定相，因此避免了樣品的吸附、污染、變性和峰形拖尾等問題，具有制備效率高、制備量大、費用低等優點，因而近年來日益受到人們的關注，已經廣泛應用于生物醫藥、天然產物、環境分析、食品和化妝品等領域， 特別在天然產物行業中已被認為是一種有效的新型分離技術。

發明內容

本發明的目的在于：克服現有技術的不足，提供一種操作簡便、綜合成本低、分離量大、產品純度高、樣品損失小的高效快速從野馬追中分離純化尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶的方法。

本發明的技術解決方案是：從野馬追中分離純化尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶的方法包括以下工藝步驟：

（1）野馬追提取物的制備：取干燥粉碎的野馬追藥材，以體積濃度80%-95%乙醇為提取溶劑，固液比為1：8-12加熱回流提取1-3h或常溫浸泡2-3天，過濾，濾渣重復處理3-4次，以去除色素等成分；固液分離后，藥渣以固液比(以原藥計算)為1:5-10用水煎煮0.5-1h，過濾并收集濾液，濾渣重復煎煮2-3次，合并濾液并真空濃縮得野馬追提取物；

(2)提取物的純化：采用體積比8:5-7:2-5的氯仿-甲醇-水為溶劑體系，上相為固定相，下相為流動相，流動相流速為1-3 mL/min，分離柱轉速為700-900 rpm，對野馬追提取物進行HSCCC分離，紫外檢測器在線監測，分別收集不同餾分并減壓干燥，得尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶。

本發明的優點是：野馬追提取物分離后餾分經HPLC檢測純度可達95％以上，各餾分進一步提純可得到99％以上的純品尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶，該方法適用于從野馬追中一步純化制備高純度的尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶，重現性好，操作簡便。

附圖說明

圖1是實施例1采用氯仿-甲醇-水（V:V:V=8:7:3）為溶劑體系時的高速逆流色譜分離純化野馬追提取物的色譜圖。

圖2是實施例1分離純化得到的尿嘧啶核苷的高效液相色譜圖。

圖3是實施例1分離純化得到的胸腺嘧啶的高效液相色譜圖。

圖4是實施例1分離純化得到的腺嘌呤的高效液相色譜圖。

圖5是實施例1分離純化得到的尿嘧啶的高效液相色譜圖。

具體實施方式

以下結合具體實施例來進一步說明本發明，這些實施例不能理解為是對技術方案的限制。