[發明專利]一種MPK細胞制備豬瘟疫苗的培養基及其使用方法

有效

• 申請號: 201410200644.5
• 申請日: 2014-05-12
• 公開（公告）號: CN104232565A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 賈馨丹
• 申請（專利權）人: 杭州國牧生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物制品領域，涉及一種培養基的配制和使用方法，更具體的，涉及一種用于大規模高密度培養MPK細胞制備豬瘟疫苗的培養基。?

背景技術

豬瘟(Classical?swine?fever，CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種高度接觸性熱性傳染病，它具有高度的傳染性和致死性，給養豬業造成了嚴重的經濟損失。目前，接種豬瘟疫苗是控制豬瘟的重要手段。用于制備豬瘟疫苗的細胞主要有ST細胞、PK-15細胞及SK-6細胞等，采用MPK細胞(Minipig?Kidney?Cell)培養豬瘟病毒的專利及文獻鮮有報道。?

豬瘟疫苗的生產工藝目前主要是轉瓶培養，進行大規模生產時：(1)需要大量的人力物力，生產效率較低，生產成本較高；(2)轉瓶內的培養條件無法做到及時調整，無法確保細胞處在最佳生長狀態，獲得的細胞密度及豬瘟病毒滴度較低；(3)轉瓶中的細胞碎片及雜蛋白多，導致各批次疫苗產品的均一性較差，質量不穩定。?

另外，采用生物反應器的微載體培養細胞制備豬瘟疫苗的研究越來越多，其生長及維持培養基中通常需要加入10％-20％的動物血清，以提供細胞生長所需的營養成分及細胞保持正常形態的支持蛋白。但是，動物血清也有其明顯的缺點：成分不明確，產品批間差異不易控制，價格昂貴，并且要求極其嚴格的檢測程序以確保血清中不含有血清來源動物可能攜帶的細菌、病毒等。?

生物反應器及多種適合的載體己被廣泛應用于動物細胞培養，其優點在于，許多種類的生物反應器可以通過灌流培養的方式實現大規模高密度培養動物細胞。為達到良好的培養效果，生物反應器的參數設置和所選培養基的成分是其中的重要因素。目前，針對生物反應器大規模高密度培養MPK細胞制備豬瘟疫苗的培養基的研究尚未見報道。?

發明內容

本發明提供了一種適用于大規模高密度培養MPK細胞制備豬瘟疫苗的培養基及其使用方法。使用本發明所述的培養基，使MPK細胞的大規模高密度培養在低血清濃度條件下進行。接種豬瘟病毒后，使用本發明所述的無血清、低蛋白的培養基用來維持病毒在培養液中的增殖。本發明提供的培養基及其使用方法，使MPK細胞可高效的貼附在微載體上，細胞生長速度快，細胞形態好，在灌流培養方式下可以在3-7d內達到極高密度；接種豬瘟病毒后，在維持培養基培養下，可以連續收獲病毒液12-17d。?

本發明所述的一種大規模高密度培養MPK細胞制備豬瘟疫苗的培養基，其組成成分及重量份為：?

上述培養基的組成成分及重量份優選為：?

上述培養基，在使用前加入2％-5％的胎牛血清或小牛血清，經過膜過濾制成在大規模高密度培養MPK細胞的培養液。?

本發明的一種大規模高密度培養得到MPK細胞接入豬瘟病毒后，維持病毒感染時期的培養基，其組成成分及重量份為：?

上述培養基的組成成分及重量份優選為：?

上述培養基還包含如下成分及其重量比例：?

上述培養基包含的添加成分，其重量份的優選比例為：?

所述大規模高密度培養MPK細胞所用的生物反應器可使用本領域常用的內部結構支持使用載體?的各類生物反應器，例如德國Eppendorf(艾本德)公司New?Brunswick?Scientific生物反應器，德國Sartorious公司生物反應器，荷蘭Applicon公司生物反應器生物反應器，杭州安普公司生物反應器，上海日泰公司生物反應器，廣州齊志公司生物反應器。優選使用德國Eppendorf(艾本德)公司New?Brunswick?Scientific生物反應器，德國Sartorious公司生物反應器，荷蘭Applicon公司生物反應器，更優選使用德國Eppendorf(艾本德)公司New?Brunswick?Scientific生物反應器。?

所述載體可選自常規使用的各種材料制的載體，包括化工材料的聚丙烯，PLA，PGA，多孔硅，PLGA，PPF等，和天然材料的葡聚糖，膠原蛋白，瓊脂，谷物蛋白等。優選使用葡聚糖材料的微載體，更優選使用美國GE公司Cytodexl球形微載體。?