[發明專利]一種增強13價肺炎球菌多糖蛋白結合物免疫原性的方法

有效

• 申請號: 201410198752.3
• 申請日: 2014-05-11
• 公開（公告）號: CN104096223B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 李建平
• 申請（專利權）人: 江蘇康泰生物醫學技術有限公司
• 主分類號: A61K39/385
• 分類號: A61K39/385;A61K47/64;A61P31/04
• 代理公司: 常州金之壇知識產權代理事務所(普通合伙) 32317
• 代理人: 周祥生

本發明公開了一種增強13價肺炎球菌多糖蛋白結合物免疫原性的方法，通過在CRM197A中加入萬能表位肽P30，并采用基因重組大腸桿菌來生產含有該萬能表位肽的P30CRM197A；然后將13種不同血清型(包括1、3、4、5、6A、6A、7F、9V、14、18C、19A、19F、以及23F)多糖通過共價鍵連接至P30CRM197A蛋白載體上形成13價肺炎球菌多糖?P30CRM197A結合物；采用這種方法獲得的13價肺炎球菌多糖?P30CRM197A結合物與不含有萬能表位肽的對應蛋白載體CRM197A獲得的13價肺炎球菌多糖?CRM197A結合物相比較，其免疫原性比對照提高了3?5倍。

技術領域

本發明涉及一種增強13價肺炎球菌多糖蛋白結合物免疫原性的方法。

背景技術

當多糖以共價鍵連接至蛋白載體上時，能將半抗原的多糖轉變成全抗原，使得多糖的免疫原性得到增強。以此方法合成的多糖‐蛋白結合疫苗已被廣泛地應用于小兒，成功地預防了包括肺炎球菌、流行性腦膜炎球菌以及流行性嗜血桿菌b型等細菌的感染。

用于合成多糖蛋白結合物的蛋白載體有多種，如破傷風類毒素、白喉類毒素、白喉毒素變異體CRM197以及基因重組技術生產的流行性嗜血桿菌表面蛋白D等；但是，由于不同蛋白的免疫特性，以不同蛋白載體合成的多糖蛋白結合物的免疫原性有差異，動物體免疫后，對于由不同蛋白載體與同一種多糖合成形成的多糖蛋白結合物，所顯現的多糖免疫原性也不同。由此可見，采用不同技術生產的蛋白載體，合成出來的多糖蛋白結合物的免疫原性有差異。

進入動物機體內后，抗原經抗原處理細胞(Antigen Process Cell，APC)處理后產生表位肽(epitope)[1]，在和主要組織相容性復合物(Major HistocompatibilityComplex，MHC)分子結合后，進而呈現在APC細胞表面，能夠被T淋巴細胞識別，這是免疫學通過實驗已經得出的結論。現在知道，一個已知表位肽的免疫原性取決于三個因素：

第一、適當表位肽的產生；

第二、和表位肽結合的主要組織相容性復合物分子的呈現；

第三、識別表位肽與主要組織相容性復合物形成的結合物的T細胞的呈現。

其中，任何一個環節的缺少都將導致免疫應答缺失。

用小鼠進行的試驗表明，缺乏適當的表位肽與主要組織相容性復合物形成的結合物分子是最常導致動物體免疫響應缺失的原因。主要組織相容性復合物具有高度的多形態性，已知的表位肽僅通過一個或者幾個等位基因(Alleles)就可結合至主要組織相容性復合物，而不是全部表位肽片段。另外，有實驗結果顯示，由于抗原處理不適當，或者T細胞耐受性空缺，也會導致免疫響應的缺失。

有實驗表明，破傷風毒素的表位肽FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE(稱為P30)[2]，可和大量不同的主要組織相容性復合物Class II結合，顯示其能夠被T細胞識別，具有萬能免疫原性的特性，被稱之萬能表位肽。

萬能免疫原性表位肽具有和多個人類主要組織相容性抗原復合物Class II分子的同型和異型體結合。這種萬能表位肽和人類主要組織相容性抗原復合物Class II分子隨機的結合可用于開發合成疫苗，因為其能夠激活人群中的大部分個體的獲得性免疫系統的應答。

研究表明，P30表位肽由破傷風毒素的947‐967氨基酸序列組成(FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE)。在含有該表位肽的蛋白進入機體后，蛋白將被攝入至APC細胞內，被消化降解。但是，這些表位肽將保存完整，在和主要組織相容性復合物結合后，被呈現在APC細胞表面，并被T細胞識別，這表明萬能表位肽以相同的方式和多種DR分子作用。