[發明專利]轉基因煙草TMV-CP定性標準樣品及其制備、定值方法

有效

• 申請號: 201410198144.2
• 申請日: 2014-05-12
• 公開（公告）號: CN103937905A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 蔣丹;曹際娟;丁健;孫曉飛
• 申請（專利權）人: 蔣丹;曹際娟;丁健;孫曉飛
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生;李馨

技術領域

本發明屬于植物檢測用實物標準樣品及其制備方法技術領域，具體涉及轉基因煙草TMV-CP定性標準樣品及其制備方法。

背景技術

1983年，世界上第一例轉基因植物誕生。1984年，英、美、法等國開始以煙草為材料進行轉基因研究。Horsh等人首創葉盤轉化法，用根癌農桿菌感染煙草葉片外植體，在培養基上獲得轉基因煙草，開創了用煙草外植體為材料進行轉基因的新途徑。1986年，美國的Powell-Abel首次將煙草花葉病毒(TMV)的外殼蛋白基因導入煙草并獲得抗TMV的轉基因煙草植株。從此，煙草轉基因研究得到了快速的發展，并取得了很大成就。目前，國際上已報道有45例以上的成功轉基因抗病毒煙草，近百例轉基因煙草進入大田試驗。轉基因煙草所用基因有：外殼蛋白基因、反義RNA基因、衛星RNA基因、復制酶基因、運動蛋白基因、抗毒素基因、胰蛋白酶抑制劑基因、幾丁質酶基因、神經肽基因、動物干擾素基因、玉米醇溶蛋白基因等。成功的轉基因煙草有：抗病毒病煙草；抗真菌、細菌病害煙草；抗除草劑煙草；抗根線蟲病煙草；抗煙青蟲害煙草；抗蚜蟲煙草、單克隆抗體煙草等。首例批準商業化種植的轉基因煙草是被歐盟1994年批準的SEITA公司的轉bxn基因的抗除草劑溴苯腈煙草。該轉基因煙草能抗高出常用濃度16倍的溴苯腈，且其農藝性狀、品質、評吸品質又與對照無明顯差異。但由于遭到一些國家的反對而未大面積推廣種植。1988年，北京大學首次用TMV外殼蛋白基因轉成抗TMV的香料煙品種，并在丹東農科所田間試驗。同年，中科院微生物所與河南農科院植保所合作用衛星RNA的互補DNA轉化煙草也獲得了抗TMV、CMV(黃瓜花葉病毒)的雙抗病毒烤煙品種煙草。隨后許多單位開展了用不同來源的目的基因向煙草轉移的研究。國內曾立項開展煙草轉基因研究的有10項之多，涉及受體品種有10多個，涉及的研究單位有20多個。

然而，人們對轉基因食品的安全性問題存在著很多的爭論。轉基因作物的生態風險、可能帶來的環境問題、作為食品對人體健康影響的問題、產品加貼標簽問題、運輸問題、國際貿易問題、知識產權問題等已引起世界廣泛性的關注。轉基因產品的安全性問題已由學術觀點分歧，發展到知識產權、環境問題、經濟問題甚至政治問題。歐盟和一些國家相繼出臺了轉基因產品管理法規，我國于2002年3月開始實施《農業轉基因生物安全管理條例》及其三個配套管理辦法。2001年，歐盟要求對轉基因食品進行標識管理，并提出對非轉基因食品只要不是有意污染，允許含有1％的轉基因產品(閾值)，而不用標識。日本、韓國、澳大利亞等不同國家的限量閾值不同，從1％-5％不等。

轉基因食品的檢測是旨在保護生物和生態安全、維護消費者權益、促進貿易和經濟健康發展的法規和政策的基本依據，其標準化將為制訂、實施和改進相關法規和政策提供有力保證。國內外轉基因食品的檢測研究剛剛起步，許多問題都有待解決，標準樣品則是該領域尚未解決的重要問題。開展轉基因成分檢驗標準樣品的研制在保證測試結果的可比性和溯源性、保障食品安全、解決貿易爭端，促進經濟發展等方面均具有重要的意義。更為嚴峻的問題是目前國外僅有轉基因大豆粉、轉基因玉米粉MON810等少數幾個品種的標準物質，價格非常昂貴，手續繁多，周轉時間長，不能適時地滿足檢驗檢疫工作的需要；日本正在加緊研制轉基因產品檢測的分子DNA參考標準物質，用于轉基因產品的定量檢測；2005年，國內研制成功了轉基因大豆粉國家二級標準物質，填補了我國在轉基因成分檢測標準樣品方面的空白，之后研制成功了轉基因油菜籽、轉基因玉米、轉基因棉花籽等標準樣品，但轉基因煙草標準樣品的研制還是空白，并且對于定性標準樣品的均勻性評價一直是一個難點，至今未有科學的統計學方法引入，鑒于國內轉基因煙草標準樣品緊缺和均勻性評價困難的狀況，本項標準樣品的制備完成，為轉基因煙草定性標準樣品研究提供了制備技術、均勻性評價和穩定性保證技術，對積極開展我國轉基因產品檢測定性標準樣品的研制，添補該測量領域的空白，具有很重要的現實意義。

發明內容

本發明為了完成本項標準樣品的制備工作，遼寧出入境檢驗檢疫局成立了研制工作小組，進行了轉基因煙草TMV-CP品系的原料檢測引物確定、原料選取、定性檢定、資料查詢、標準樣品的制備、均勻性和穩定性檢查、定值等多項工作，具體的：