[發明專利]紫海膽殼棘提取物及在制備抑制癌細胞生長藥物中的應用

在審

• 申請號: 201410193518.1
• 申請日: 2014-05-09
• 公開（公告）號: CN104055796A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 金橋;李偉;佟長青;曲敏;朱春芃
• 申請（專利權）人: 大連海洋大學;金橋
• 主分類號: A61K35/56
• 分類號: A61K35/56;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 大連非凡專利事務所 21220
• 代理人: 閃紅霞

技術領域

本發明涉及一種紫海膽殼棘提取物及在制備抑制癌細胞生長藥物中的應用。

背景技術

海膽始載于《本草原始》，別名海膽虎（《動物圖譜﹒棘皮》），屬于棘皮動物門（Echinodermata）、海膽綱（Echinoidea），紫海膽Anthocidaris crassispina (A．Agassiz)是其中一種。

海膽由殼（骨殼）、棘（棘刺）和內臟組成，是營養豐富的海珍品。盡管現代醫學證明海膽殼、棘及生殖腺等部位有良好的藥用價值，但所報道的主要功效如下：海膽性“咸”，“平”（《中藥志》），“有小毒”（《山東中草藥手冊》），“主治心疼”（《本草原始》），有“軟堅化痰，散結消腫，消瘰疬痰核、制酸止痛，清熱解毒”的功用。迄今為止，未見有關于紫海膽殼棘提取物有抑制癌細胞生長作用的相關報道，以至于海膽殼棘多被作為廢棄物而丟棄，浪費了潛在的藥用資源。

發明內容

本發明是為了解決現有技術所存在的上述技術問題，提供一種紫海膽殼棘提取物及在制備抑制癌細胞生長藥物中的應用。

本發明的技術解決方案是：一種紫海膽殼棘提取物，其特征是依次按照如下步驟提?。?/p>

a. 以紫海膽Anthocidaris crassipina動物殼棘為原料，經粉碎烘干后用乙醇提取，將提取液減壓濃縮后得浸膏；

b. 取浸膏溶于水，用石油醚萃取，合并水相部分；再用乙酸乙酯萃取，合并水相部分；再用正丁醇萃取，合并正丁醇層，減壓濃縮；

c. 將經減壓濃縮的正丁醇層經正相硅膠柱層析，用乙酸乙酯-甲醇進行梯度洗脫，收集乙酸乙酯：甲醇梯度為100：5~100：6的洗脫液，為一次洗脫液；濃縮所收集的一次洗脫液并再次進行正相硅膠柱層析，用乙酸乙酯-甲醇進行梯度洗脫，收集乙酸乙酯：甲醇梯度為100：3~100：4的洗脫液，為二次洗脫液，合并、濃縮二次洗脫液并重結晶，得到紫海膽殼棘提取物。

所述a步驟是以質量濃度75%的乙醇在23~28℃的溫度條件下提取4小時，料液比為1：20。

一種上述紫海膽殼棘提取物在制備抑制癌細胞生長藥物中的應用。

所述紫海膽殼棘提取物在制備抑制癌細胞生長藥物中的應用，是在制備抑制血癌、乳腺癌或直腸癌細胞生長藥物中的應用。

本發明是以來源廣泛、價格低廉的海膽加工廢棄物——海膽殼、棘為原料，利用溶劑提取法對其進行提取，并經有機溶劑萃取、硅膠柱層析而獲得的提取物。所得到的提取物經抗腫瘤實驗證明，對人慢性髓性白血病細胞K562、人早幼粒極性白血病細胞HL60、人乳腺癌細胞SKBR-3、人乳腺癌細胞MCF-7、人結直腸腺癌細胞SW620有顯著的細胞毒性作用，其IC50值均在30-90μg·ml^-1之間，并具有劑量依賴性。細胞凋亡實驗表明該提取物有顯著誘導HL60急髓白血病M3細胞株、SKBR-3人乳腺癌細胞和SW620結腸癌細胞凋亡的作用，其誘導凋亡作用有劑量依賴性，因此本發明提取物有顯著的細胞毒性和誘導細胞凋亡的作用。本發明操作簡單，所用溶劑均為普通化學試劑，易重復，適于大規模生產。

附圖說明

圖1本發明提取物對人慢性髓性白血病細胞K562體外實驗抑制率示意圖。

圖2本發明提取物對人早幼粒極性白血病細胞HL60體外實驗抑制率示意圖。

圖3是本發明提取物對人乳腺癌細胞SKBR-3體外實驗抑制率示意圖。

圖4是本發明提取物對人乳腺癌細胞MCF-7體外實驗抑制率示意圖。

圖5是本發明取物對人結直腸腺癌細胞SW620體外實驗抑制率示意圖。

圖6~圖10本發明提取物對人早幼粒極性白血病細胞HL60的誘導凋亡作用示意圖。

圖11~圖15本發明提取物對人乳腺癌細胞SKBR-3的誘導凋亡作用示意圖。

圖16~圖20本發明提取物對人結直腸腺癌細胞SW620的誘導凋亡作用示意圖。

圖21本發明提取物對人早幼粒極性白血病細胞HL60的流式細胞術實驗抑制率示意圖。

圖22本發明提取物對人乳腺癌細胞SKBR-3的流式細胞術實驗抑制率示意圖。

圖23本發明提取物對人結直腸腺癌細胞SW620的流式細胞術實驗抑制率示意圖。

具體實施方式

依次按照如下步驟提?。?/p>