[發明專利]一種抗生素生產車間環境監測用無菌培養基平皿及其制備方法

無效

• 申請號: 201410192279.8
• 申請日: 2014-05-08
• 公開（公告）號: CN103937663A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 張加慧;沈祝飛;周冰
• 申請（專利權）人: 杭州北望生物技術有限公司
• 主分類號: C12M1/22
• 分類號: C12M1/22;C12Q1/02
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

技術領域

本發明涉及無菌環境的檢測，尤其涉及一種抗生素生產車間環境監測用無菌培養基平皿及其制備方法。

背景技術

藥品的生產、制造都必須在潔凈環境下完成。藥品生產中的主要污染來自于微生物污染，如何高效、準確地監測藥品生產環境中的微生物負荷，是每個藥品生產企業必須的日常工作。

無菌培養基平皿作為一種傳統微生物培養以及檢測方法在科研和制藥生產中使用十分普遍，例如微生物培養鑒定、無菌環境監測等等。目前，無論在學校、科研單位、醫院、生產制藥企業還是各類生產車間，微生物檢驗使用的無菌培養基平皿的消耗量十分龐大。據統計，一般生物制藥企業的一個生產周期或車間每月定期環境監測一次就需要約100個培養基平皿。傳統的自制無菌培養基平皿不僅工序繁瑣、數量少，還很耗時，不足以應付突發事件以及快速的需要，并且存在較大的人為染菌風險。

然而，普通的無菌培養基平皿難以應付β-內酰胺類抗生素生產車間的無菌環境監測。由于β-內酰胺類抗生素能抑制微生物的生長，普通的無菌培養基平皿會造成微生物檢驗中的假陰性結果。

發明內容

為了解決上述的技術問題，本發明的一個目的是提供種抗生素生產車間環境監測用無菌培養基平皿，使用該無菌培養基平皿方法簡單、高效，可以準確的檢驗β-內酰胺類抗生素生產車間潔凈區域的微生物負荷，避免微生物檢驗中的假陰性結果。本發明的另外一個目的是提供上述的無菌培養基平皿的制備方法。

為了實現上述的第一個目的，本發明采用了以下的技術方案：

一種抗生素生產車間環境監測用無菌培養基平皿，所述的抗生素為β-內酰胺類抗生素，在培養基平皿內設置培養基，培養基中添加了與所述的β-內酰胺類抗生素相對應的β-內酰胺酶，β-內酰胺酶的添加量為10萬～800萬單位/皿。

作為優選，所述的培養基平皿采用塑料材質，培養基平皿的底板直徑為90?mm，培養基厚度為3～4?mm。

作為優選，所述的培養基選用TSA培養基、NA培養基、MH瓊脂培養基或沙氏葡萄糖瓊脂培養基。

作為優選，所述的β-內酰胺酶為青霉素酶、頭孢菌素酶和金屬酶中的一種或多種混合。

作為優選，所述的β-內酰胺酶為青霉素酶，青霉素酶的添加量為100萬～500萬單位/皿。

作為優選，所述的β-內酰胺酶為頭孢菌素酶，頭孢菌素酶的添加量為50萬～200萬單位/皿。

作為優選，所述的β-內酰胺酶為金屬酶，金屬酶的添加量為50萬～200萬單位/皿。

為了實現上述的第二個目的，本發明采用了以下的技術方案：

一種制備上述的無菌培養基平皿的方法，該方法包括以下的步驟：

步驟A：配制培養基，110~130℃高壓滅菌10~30分鐘；

步驟B：培養基冷卻至55~65℃，加入具有酶活性的β-內酰胺酶，混合均勻，并水浴保溫培養基在55~65℃；

步驟C：在無菌操作室，用灌裝機將培養基均勻平鋪于平皿底板，冷卻凝固；

步驟D：培養基凝固后，蓋上蓋板，然后按包裝規格疊好，真空密封，最后包裝裝箱后經60Co-γ射線滅菌。

作為優選，步驟C中，培養基以20?mL/皿的體積裝入平皿底板。

作為優選，步驟D中，包裝規格為10皿/袋。

本發明采用以上技術方案，有益效果為：

1.?本發明新型無菌培養基平皿結構簡潔，使用方便，可實現大規模連續化生產，且成本較低；

2.?每包平皿均為獨立密封，使用數量較為靈活；

3.?平皿經過輻照滅菌后，在4℃～20℃條件下保質期可長達半年。保質期內培養基仍保持無菌性以及對菌體的促生長性，并且添加的β-內酰胺酶能夠一直保持較高的活性；

4.?此生產工藝可以應用到多種固體培養基上，除以上所述的TSA培養基和NA培養基外，還可應用于MH瓊脂培養基、沙氏葡萄糖瓊脂培養基等等。

具體實施方式

實施例1

配制TSA固體培養基，其中胰蛋白胨15.0?g/L，大豆蛋白胨5.0?g/L，氯化鈉5.0?g/L，瓊脂14?g/L，pH值7.5。

將配置好的培養基于121℃下高壓滅菌20分鐘，待其冷卻至60℃，加入青霉素酶，混合均勻，使得青霉素酶溶解在TSA培養基中的濃度為25萬單位/mL。

在無菌操作室，用灌裝機將20?mL的TSA加酶培養基均勻平鋪于平皿底板，冷卻凝固，蓋上平皿上蓋。