[發(fā)明專利]一種檢測(cè)腸道屏障功能的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410191409.6
• 申請(qǐng)日: 2014-05-07
• 公開（公告）號(hào): CN105699640B
• 公開（公告）日: 2017-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李維勤;王加義;桂春爽;董婷婷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京中生金域診斷技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/52
• 分類號(hào): G01N33/52
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

1.一種檢測(cè)腸道屏障功能的試劑盒，其特征在于，其包括：

1)反應(yīng)裝置

所述反應(yīng)裝置包括血漿分離器和反應(yīng)基板，所述反應(yīng)基板包含空白對(duì)照孔、二胺氧化酶反應(yīng)孔、D-乳酸反應(yīng)孔和細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)孔；

2)一種或多種顯色液；

3)一種或多種稀釋液；

所述的血漿分離器每個(gè)孔內(nèi)設(shè)有血漿分離膜；所述的空白對(duì)照孔內(nèi)放有空白墊；

其中，所述的二胺氧化酶反應(yīng)孔從孔底部起依次放有第一底物墊和顯色墊：所述第一底物墊由第一底物溶液滴加在載體上制備而成；所述的第一底物溶液以600-800mmol/L pH6.5-7.0的磷酸鈉和磷酸鉀緩沖液為溶劑，包括0.0001-0.01g/mL的第一底物、10-10000U/mL的過(guò)氧化物酶、0.005％-50％的D-海藻糖和0.005％-50％的吐溫20，所述第一底物為二胺氧化酶底物；所述顯色墊由第一顯色液滴加在載體上制備而成；所述第一顯色液以水為溶劑，包括1-5mg/mL的第一顯色劑和10-20g/L D-海藻糖；所述第一顯色劑為TOOS、DA-67和Ampliflu Red；

其中，所述的D-乳酸反應(yīng)孔從孔底部起依次放有酶墊和顯色劑墊：所述酶墊由酶液滴加在載體上制備而成；所述的酶液以水為溶劑，包括10-1000U/mL的D-乳酸脫氫酶，200-300mmol/L pH8.0-9.0的Tris-HCl或PIPES緩沖液，0.005％-50％的牛血清白蛋白和肌醇；所述顯色劑墊由第二顯色液滴加在載體上制備而成；所述的第二顯色液以水為溶劑，包括：

0.01-10mmol/L的NAD；

0.01-100mmol/L的黃遞酶或者N-甲基吩嗪硫酸鹽；

0.1-100mg/mL的第二顯色劑，所述第二顯色劑為NBT或MTT；

0.005％-50％的牛血清白蛋白和肌醇；

其中，所述細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)孔放有第二底物墊。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試劑盒，其特征在于，所述稀釋液以水為溶劑，包括0.00001-10mg/mL的第一激活劑和pH6.0-9.0、0.01-100mmol/L緩沖液，所述第一激活劑為乙二胺四乙酸二鈉、K⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、Mg²⁺、Li⁺、Na⁺、Co²⁺、Triton X-100、吐溫20或吐溫80中的一種或多種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述試劑盒，其中，所述第一激活劑為Mn²⁺。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述試劑盒，所述第二底物墊由第二底物溶液滴加在載體上制備而成；所述的第二底物溶液以水為溶劑，包括0.02-20mg/mL的第二底物、0.01-10mol/L pH6.0-9.0的緩沖液、0.1-10％的第二激活劑和0.005％-50％的穩(wěn)定劑，所述第二底物為甘氨酰-L-脯氨酸-4-甲氧基-β-萘胺、精氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺、甘氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺、精氨酰-精氨酸-β-萘胺、甘氨酰-L-脯氨酸-β-萘胺、亮氨酰-甘氨酸-4-甲氧基-β-萘胺中的一種或多種，所述第二激活劑為K⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、Mg²⁺、Li⁺、Na⁺、Co²⁺、Triton X-100、吐溫20或吐溫80中的一種或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其中，所述第二底物為精氨酰-精氨酸-4-甲氧基-β-萘胺。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其中，所述第二激活劑為Triton X-100。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-3、5-6任一項(xiàng)所述試劑盒，其特征在于，所述顯色墊、顯色劑墊、酶墊、第一底物墊和第二底物墊的載體均為濾紙、玻璃纖維或者層析紙。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述顯色墊、顯色劑墊、酶墊、第一底物墊和第二底物墊的載體均為濾紙、玻璃纖維或者層析紙。