[發(fā)明專(zhuān)利]人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基及人多能干細(xì)胞的培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410190561.2
• 申請(qǐng)日: 2014-05-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103952374A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李揚(yáng);蘭峰;李厚鵬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京賽貝生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/074
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/074
• 代理公司: 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 吳貴明;張永明

1.一種人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑；

其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12培養(yǎng)基；

所述添加劑包括碳酸氫鈉400～600μg/ml、硒酸鈉8～20ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子10～30ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子80～120ng/ml、重組人乳鐵蛋白7～13μg/ml、抗壞血酸50～70μg/ml以及重組人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1ng/ml～3ng/ml。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑包括碳酸氫鈉520～580μg/ml、硒酸鈉12～16ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子15～25ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子90～110ng/ml、重組人乳鐵蛋白10～12μg/ml、抗壞血酸63～66μg/ml以及重組人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1.5ng/ml～2.5ng/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑包括碳酸氫鈉543μg/ml、硒酸鈉14ng/ml、重組人胰島素生長(zhǎng)因子20ng/ml、重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子100ng/ml、重組人乳鐵蛋白11μg/ml、抗壞血酸65μg/ml以及重組人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子2ng/m。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基在4～8℃下保存，所述添加劑在-20～-80℃下冰凍保存。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基在使用前配制，具體包括以下步驟：

在2～8℃下化凍所述添加劑；

將所述添加劑與所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以7:500的體積配混合后形成所述人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基在使用前0～14天配制，并在2～8℃下保存。

7.一種人多能干細(xì)胞的培養(yǎng)方法，其特征在于，采用如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，將人多能干細(xì)胞接種到鋪有基質(zhì)膠或玻璃粘連蛋白的培養(yǎng)皿中；

S2，向所述培養(yǎng)皿中加入人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，每隔一天換一次所述人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)方法進(jìn)一步包括：

S3，當(dāng)所述人多能干細(xì)胞匯合度達(dá)到70％～80％時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)，使用0.5m?MEDTA消化所述人多能干細(xì)胞為小團(tuán)塊，將所述小團(tuán)塊接種到鋪有基質(zhì)膠或玻璃粘連蛋白的培養(yǎng)皿中，用所述人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟S2是在溫度為37℃，5％CO₂的培養(yǎng)箱中進(jìn)行的。