[發(fā)明專利]抗干擾性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410190167.9
• 申請日: 2014-05-07
• 公開（公告）號: CN104111337A
• 公開（公告）日: 2014-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 甘宜梧;岳慶妮;李靜;譚柏清
• 申請（專利權(quán)）人: 山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 張世靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及臨床體外檢測試劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種同型半胱氨酸檢測試劑盒。?

背景技術(shù)

同型半胱氨酸即高半胱氨酸是氨基酸半胱氨酸的異種，在旁鏈部份硫醇基（-SH）前包含一個額外的亞甲基（-CH2-），1969?年Mccully?從遺傳性同型半胱氨酸尿癥死亡兒童尸檢中發(fā)現(xiàn),?其體循環(huán)內(nèi)存在廣泛的動脈血栓形成及動脈粥樣硬化（AS）的病理表現(xiàn)，由此提出高同型半胱氨酸血癥（hyperhomocysteinemia,HHCY）?可導(dǎo)致動脈粥樣硬化性血管性疾病的假說。此后，各國學(xué)者對HCY?與心腦血管疾病的相關(guān)關(guān)系做了大量研究。Hcy?是一種含巰基的氨基酸，主要來源于飲食攝取的蛋氨酸，是蛋氨酸和半胱氨酸代謝過程中一個重要的中間產(chǎn)物，其本身并不參加蛋白質(zhì)的合成。在體內(nèi)，約1/2?的Hcy?和甲基四氫葉酸在蛋氨酸合成酶（Methionine?Synthase?reductase,MS）的作用下，生成蛋氨酸和四氫葉酸，四氫葉酸在N5,N10-亞甲基四氫葉酸還原酶（Methylenetetralydrofolate,MTHFR）?的作用下生成甲基四氫葉酸；其余約1/2?的Hcy?通過轉(zhuǎn)硫基途徑，即Hcy?與絲氨酸在胱硫醚β合成酶（Cystathionineβ-synthase,CBS）作用下形成胱硫醚，一部分在胱硫醚裂解酶的作用下形成半胱氨酸，最后生成丙酮酸、硫酸和水，此過程需維生素B6?為輔酶及絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶，另一部分則生成同型絲氨酸。任何原因引起前兩條代謝途徑障礙時，升高的Hcy?在氨基酰-tRNA?合成酶的作用下，生成同型半胱氨酸硫內(nèi)酯（homocysteine?thiolactone,HTL），HTL?是Hcy?在氨基酰-tRNA合成酶編輯或校正過程中形成的反應(yīng)產(chǎn)物，屬一種環(huán)硫酯。Hcy可以直接或間接導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖，影響低密度脂蛋白的氧化，增強(qiáng)血小板功能，促進(jìn)血栓形成。?

最早檢測同型半胱氨酸是氨基酸分析法，Ueland等測定血清中同型半胱氨酸，后經(jīng)改良，目前常用方法包括以下幾種。?

同位素法：由Refsum等1985年建立的方法。該方法通過14C標(biāo)記的腺苷與HCY縮合后，經(jīng)色譜分離，液體閃爍計數(shù)放射強(qiáng)度來測HCY濃度。該方法靈敏度高，特異性強(qiáng)，但操作繁瑣且有放射污染，未能推廣使用。?

色譜法：1987年Stabler首先報道了氣相色譜―――質(zhì)譜法測定同型半胱氨酸。該法可同時測定半胱氨酸、蛋氨酸、胱硫醚和甲基甘氨酸等多種物質(zhì)。雖然靈敏度、特異性好，但儀器價格昂貴而不能推廣。高效液相色譜法（HPLC）是目前比較成熟且推廣使用的方法，不足之處是樣品處理、層析條件、樣品檢測及定量的諸多變異，使其難以標(biāo)準(zhǔn)化。Fiskertrand等首先于1993年用全自動高效液相色譜法對血漿和尿液的HCY和硫醇物進(jìn)行測定。HPLC根據(jù)衍生方式（柱前或柱后衍生）、檢測方法（熒光、電化學(xué)）可分為多種方法。應(yīng)用HPLC準(zhǔn)確測定同型半胱氨酸需要優(yōu)良的設(shè)備、高超的技術(shù)經(jīng)驗和應(yīng)用HPLC方法適當(dāng)?shù)臅r間，另外選擇和制備內(nèi)部質(zhì)控也相當(dāng)重要。?

免疫學(xué)法：該法應(yīng)用特異性的抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆技術(shù)，采用熒光偏振法或免疫法測定HCY.美國雅培公司采用全自動熒光偏振免疫技術(shù)，用AXSYM儀器檢測HCY，反應(yīng)原理為：正常人血漿中HCY約1%以還原型存在，70%與白蛋白結(jié)合，30%形成小分子二硫化物。血漿標(biāo)本在含二硫蘇糖醇的預(yù)處理液作用下，HCY、混合的二硫化物及蛋白結(jié)合型等均被還原成游離HCY形式（tHCY）：tHCY在S-腺苷-L-同型半胱氨酸（SAH）水解酶和過量腺苷存在下，被轉(zhuǎn)換成SAH；預(yù)稀釋的SAH混合物、抗-SAH單克隆抗體及標(biāo)記的熒光S-腺苷-L-半胱氨酸示蹤物一同孵育，儀器自動檢測偏振光的改變，即可測出標(biāo)本總HCY水平。此方法快捷、操作簡單、自動化程度高，可減少人為誤差，具有良好的準(zhǔn)確度與精密度，適合大多數(shù)臨床實驗室應(yīng)用。?

其中HPLC法是最常用的方法，但是需要特殊設(shè)備。免疫學(xué)法是利用酶的底物特性，放大靶物質(zhì)（被測物）的檢測方法，此法僅循環(huán)靶物質(zhì)，具有快速、簡便、靈敏度高，易于自動化等特點。?