[發(fā)明專利]全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410188735.1
• 申請日: 2014-05-06
• 公開（公告）號: CN104031155A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張大鵬;張志敏;武志娟;趙雅;任培華;梁金羽;朱敬杰;韓福國;劉清飛
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多糖的提取純化方法，尤其涉及一種綠全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法；屬于中藥提取技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

全真一氣湯為明清醫(yī)學(xué)大家馮兆張《馮氏錦囊秘錄》中的著名方劑。由熟地黃、白術(shù)、人參、麥冬、五味子、附子、牛膝組成。臨床廣泛用于治療各種老年虛損性疾病，如胃腸疾病，慢性阻塞性肺病、肺癌、等辯證屬氣血陰陽俱虛免疫功能低下者，療效顯著。現(xiàn)代研究表明，多糖具有調(diào)節(jié)免疫，降血脂，抗腫瘤，抗炎，抗衰老等生理功能。?

目前有關(guān)全真一氣湯多糖的提取研究報道很少，本課題組近年對全真一氣湯多糖進(jìn)行了一定程度的探討，發(fā)現(xiàn)其主要的藥理作用為增強(qiáng)免疫力，對正常小鼠及環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠的非特異性免疫功能有不同程度的增強(qiáng)作用，可提高環(huán)磷酰胺抑制的體液免疫功能，具有腸道粘膜免疫調(diào)節(jié)作用，其主要機(jī)理為升高免疫抑制小鼠血清IL-6和TNF-α水平，刺激免疫抑制小鼠機(jī)體的細(xì)胞因子分泌，從而達(dá)到調(diào)節(jié)免疫功能的作用。?

陳虹在碩士論文中雖然提供了《全真一氣湯總多糖的提取與質(zhì)量控制初步研究》，但是所得的多糖含量不高，提取率也比較低。?

發(fā)明內(nèi)容

針對上述不足，發(fā)明目的在于提供一種提取純化方法簡單，多糖含量高的全真一氣湯多糖的提取純化方法。?

為此，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是這樣的：該全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，依次包括下述步驟：?

1)按全真一氣湯配方比例稱取熟地黃、白術(shù)、人參、麥冬、五味子、附子、牛膝，除熟地外，其余藥材干燥，粉碎；?

2)將熟地切段，與步驟1)粉碎后的藥材混合，用超聲提取法提取藥材1-3次，每次7-9倍水提取25-35min后粗濾，靜置過夜后離心分離，取上清液；?

3)將步驟2)中的上清液濃縮至相對密度為1.15-1.2，用乙醇調(diào)至藥液乙醇含量為75-85％，靜置離心分離，取下層沉淀用乙醇洗滌后于55-65℃真空干燥得粗多糖A；?

4)取步驟3)粗多糖A加水溶解，搖勻，酸調(diào)節(jié)pH至5-6，加入木瓜蛋白酶,在45-55℃，?酶解4-6h，滅活，離心除去沉淀，取下層液得粗多糖酶解液B；?

5)向步驟4)粗多糖酶解液B中加入其體積1/4-1/6的氯仿-正丁醇溶液，震蕩，靜置過夜，收集上層水相溶液，得到多糖溶液B；?

6)取步驟5)多糖溶液A，加水配制成濃度為3-5mg/ml的溶液，調(diào)節(jié)多糖溶液的pH至4.5-5.5，加入大孔樹脂在45-55℃水浴下攪拌1-3h，過濾的粗多糖B；?

7)取步驟6)粗多糖B加水制成濃度為0.15-0.25mg/mL的溶液，進(jìn)行超濾，收集截留液，濃縮后在55-65℃真空干燥，得到精多糖。?

進(jìn)一步的，上述的全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，步驟1)所述的干燥溫度均為60℃。?

進(jìn)一步的，上述的全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，步驟2)所述的超聲條件為在室溫下超2s停2s，功率800w。?

上述的全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，步驟2)、步驟3)和步驟4)所述的離心條件均為5000rpm×10min。?

進(jìn)一步的，上述的全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，步驟3)所述的上清液濃縮是在60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至藥液相對密度為1.15-1.2。?

進(jìn)一步的，上述的全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，步驟4)所述的酸為冰醋酸。?

進(jìn)一步的，上述的全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，取步驟2)粗多糖A:水:木瓜蛋白酶的質(zhì)量比是1：50:1.5。?

進(jìn)一步的，上述的全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，步驟4)所述的滅活是在沸水浴滅活5min。?

進(jìn)一步的，上述的全真一氣湯多糖的工業(yè)化提取純化的方法，步驟7)所述的超濾進(jìn)料流速為10-14mL/min，壓力為0.08-012MPa，使得透過量與截留量的體積比為1:1，當(dāng)溶液全部進(jìn)入超濾柱時，記為超濾一次，將截留液中加200mL蒸餾水，繼續(xù)超濾，循環(huán)25次后，收集截留液。?

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案：操作簡單，多糖含量高，純度高，并且易于工業(yè)化生產(chǎn)，通過脫蛋白，超濾處理后，多糖含量均上升較高。雖然脫蛋白處理本身并沒有提高粗多糖中的多糖含量，但是這個步驟對于整個多糖的精制過程是必不可少的。?